小干扰RNA调控多药耐药相关蛋白1基因对SMMC7721肝癌细胞株多药耐药性的影响

摘要

目的将表达特异性的小干扰RNA（siRNA）基因片段导人SMMC7721耐药细胞,干扰多药耐药相关蛋白1（MRP1）基因后,观察其对细胞化疗敏感性的影响。方法使用浓度递增法制作耐阿霉素（ADM）细胞株,将ADM浓度在2 mg/L时培养出的细胞,命名为SMMC7721/ADM细胞,转染25、50、75 nmol/L siRNA沉默此耐药株MRP1基因,于转染后24、48、72h使用实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测各组细胞MRP1 mRNA表达水平。于12、24、36、48、60 h用噻唑蓝（MTT）法检测细胞对化疗药物的敏感性,加入反应试剂进行流式细胞仪检测细胞凋亡水平,使用Western blot分别检测细胞中MRP1蛋白表达含量。细胞注入裸鼠右侧肩胛区,14 d后测量肿瘤的长径和宽径。结果 SMMC7721/ADM细胞对阿霉素、5-氟尿嘧啶（5-Fu）、长春新碱（VCR）、奥沙利铂（OHP）的耐药系数分别为25.43、68.32、39.17、18.31。RT-qPCR检测沉默效率,可见MRP1的表达明显降低（P＜0.05）。MRP1基因沉默后,Western blot技术可见MRP1蛋白明显降低。流式细胞仪可见细胞凋亡明显多于沉默前（P＜0.05）。多药耐药性的检测可见细胞对上述药物耐药系数降低为5.73、15.86、2.49、1.84。动物实验监测肿瘤生长,可见肿瘤生长率明显降低。结论SMMC7721耐药细胞株在使用siRNA沉默MRP1基因后,对化疗药的耐药性有明显下降。MRP1基因与SMMC7721肝癌细胞的多药耐药性显著相关,可通过沉默MRP1基因来提高耐药肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。