免疫磁珠法分离胆囊癌CD133阳性细胞及其生物学特性鉴定

摘要

目的建立胆囊癌CD133+细胞分离纯化的方法,观察胆囊癌CD133+细胞和CD133-细胞生物学特性的差异。方法流式细胞仪检测胆囊癌GBC-SD、SGC996细胞中CD133所占百分比,免疫磁珠法分选CD133+细胞亚群,免疫荧光法定位检测CD133蛋白表达,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测CD133 mRNA表达,细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测CD133+组和CD133-组细胞增殖能力及对5-氟尿嘧啶（5-Fu）耐药特性的差异,单克隆形成实验观察单个CD133+细胞生长特性。结果胆囊癌GBC-SD、SGC996细胞中CD133+亚群所占相对百分比为（68.5±2.9）%、（0.3±0.2）%。GBC-SD组CD133 mRNA相对灰度值（0.6466±0.0259）显著高于SGC996组（0.2181±0.0108,P＜0.01）。CD133蛋白定位于细胞膜表面,并在GBC-SD细胞中呈强表达。人胆囊癌GBC-SD细胞分选后,CD133+组CD133蛋白表达明显强于CD133-组。CD133+组中CD133+亚群所占比例为（90.4±0.9）%。CD133+组CD133mRNA相对灰度值（0.7734±0.0217）显著高于CD133-组（0.2146±0.0174,P＜0.01）。CD133+组细胞增殖能力明显强于CD133-组（P＜0.01）。经5-Fu（0.1μg/ml）处理后,CD133+组细胞生存率明显高于CD133-组（P＜0.05）。单克隆形成实验结果示单个CD133+细胞可形成新的细胞克隆,且CD133+组[（36.25±2.99）%]细胞克隆球形成率高于CD133-组[（4.50±1.29）%,P＜0.01]。体内成瘤实验结果示CD133+组与未分选组移植成瘤率分别为100%和60%,而CD133-组不成瘤。结论免疫磁珠分选系统可成功分离高纯度的胆囊癌CD133+细胞,而且人胆囊癌CD133+细胞具有一定的增殖、耐药、自我更新及致瘤潜能。