桥梁分子1-S的SH3结构域对胶质瘤细胞增殖和运动能力的影响

摘要

目的观察桥梁分子1-S（ITSN1-S）的SH3结构域对恶性胶质瘤细胞LN229增殖和运动能力的影响,并探讨其相关分子机制。方法将ITSN1-S的全长和去除SH3结构域的ITSN1-S（即EH1-EH2-CC片段）分别连接入双酶切后线性化的PCDH-CMV-MCS-EF1-Puro载体中作为实验组,用不作处理的PCDH-CMV-MCS-EF1-Puro载体作为对照组,通过慢病毒转染上述3个重组质粒进入LN229细胞,筛选稳定表达的细胞克隆;Western blot检测目的蛋白的表达;噻唑蓝（MTT）实验检测连续培养6 d各组胶质瘤细胞的增殖;软琼脂克隆形成实验检测连续培养2周的各组胶质瘤细胞克隆形成能力;划痕试验检测各组胶质瘤细胞在0、3、6、9、12、24 h的非定向运动能力。结果 MTT实验和软琼脂克隆形成实验均证明ITSN1-S全长组细胞的增殖能力比EH1-EH2-CC片段组和空载体对照组显著增强（P＜0.05）,但EH1-EH2-CC片段组和空载体对照组两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。第6天时ITSN1-S全长组、EH1-EH2-CC片段组和空载体对照组细胞增殖率分别为（523.60±32.12）%、（409.54±31.33）%和（353.89±13.98）%;第14天时ITSN1-S全长组克隆形成率达（46.49±2.34）%,而EH1-EH2-CC片段组和空载体对照组克隆形成率分别为（23.00±1.66）%和（17.68±3.47）%。划痕试验12 h时ITSN1-S全长组细胞的运动速度比EH1-EH2-CC片段组和空载体对照组明显提高（P＜0.05）,但EH1-EH2-CC片段组和空载体对照组两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。24 h时ITSN1-S全长组运动距离为（0.39±0.02）mm,E H1-EH2-CC片段组和空载体对照组分别为（0.30±0.02）mm和（0.29±0.01）mm。结论 ITSN1-S参与调节胶质瘤细胞的增殖和运动,ITSN1-S中SH3结构域是影响胶质瘤细胞增殖与运动能力的主要功能结构域。