木犀草素诱导结肠癌HT-29细胞凋亡及其作用机制

摘要

目的 探讨木犀草素在体外诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的作用机制.方法 体外培养人结肠癌细胞HT-29,以不同浓度木犀草素处理后,应用噻唑蓝(MTT)法检测木犀草素对HT-29细胞增殖的抑制作用;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)双标记流式细胞术检测细胞凋亡率;采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9 mRNA表达水平;Western blot检测木犀草素对HT-29细胞内bcl-2、bax、Caspase-3、Caspase-9等蛋白表达的影响.结果 MTT结果显示木犀草素能显著抑制HT-29细胞的生长、增殖,呈浓度和时间效应关系(72 h最高抑制率达78.72％);流式细胞仪分析示木犀草素能诱导细胞发生凋亡,凋亡率可达(23.78±1.03)％;Real-time PCR检测结果示木犀草素上调了bax、Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达,抑制了bcl-2 mRNA表达;木犀草素干预后,Western blot结果示bcl-2蛋白呈浓度剂量依赖性递减;而bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达则显著增高.结论 木犀草素能通过线粒体通路抑制人结肠癌HT-29细胞的增殖并诱导其凋亡.