卷曲蛋白跨膜受体7基因启动子的构建及其肝癌特异性转录调控活性研究

摘要

目的 构建卷曲蛋白跨膜受体7(FZD7)基因启动子,并分析其肝癌特异性转录调控活性.方法 构建FZD7启动子及FZD7启动子变异体(Mut FZD7),并设计合成荧光报告载体pFZD7-绿色荧光蛋白(GFP)、Mut pFZD7-GFP.将各重组质粒载体转染至肝癌细胞HepG2、SMMC7721及正常肝细胞L02中,用荧光显微镜和流式细胞仪检测GFP的表达.在裸鼠肝癌移植瘤模型瘤体内注射各重组质粒后,制备肿瘤组织冰冻切片并在荧光显微镜下观察GFP表达.结果 转染pFZD7-GFP的肝癌细胞HepG2和SMMC7721中均有高强度荧光,且GFP表达率分别为(45.1±3.1)％和(25.3±2.5)％,显著高于L02细胞的GFP表达率[(0.4±0.3)％,P＜0.05];而转染Mut pFZD7-GFP的HepG2、SMMC7721和L02细胞中荧光强度明显较弱,且GFP表达率分别为(21.5±2.7)％、(12.3±2.1)％和(0.2±0.1)％,均显著低于转染pFZD7-GFP的各对应组(P＜0.05);对照组中,转染对照质粒pFZD7-Luc的肝癌细胞及L02细胞中未检测到GFP的表达,而转染对照质粒pEGFP-N1的各细胞株中均有大量细胞表达GFP.在裸鼠肝癌移植瘤中有相似的结果.结论 FZD7启动子具有高度的肝癌特异性活性,T细胞因子/淋巴增强因子(TCF/LEF)转录因子结合位点在其转录调控中发挥关键作用.