核心蛋白多糖对高糖条件下人晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用及其机制

摘要

目的探讨核心蛋白多糖(DCN)对高糖条件下人晶状体上皮细胞(LECs)凋亡及氧化应激水平的影响。方法体外培养人LECs(HLE-B3),采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测不同浓度DCN对HLE-B3细胞存活力的影响,筛选出合适的DCN作用浓度。取对数期细胞分为正常对照组、DCN单纯处理组、高糖组和DCN+高糖组。采用流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞内活性氧簇(ROS)表达水平,采用酶标仪检测细胞总超氧化物歧化酶(SOD)活性及还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)比值,采用Westernblot法检测凋亡蛋白bax和bcl-2的表达。结果对数生长期HLE-B3细胞呈梭形,大小均匀,细胞核居中,细胞排列整齐。CCK-8法检测结果显示,在0、10、50、100和200nmol/LDCN处理HLE-B3细胞后24h,各组HLE-B3的细胞存活率均大于90%,差异无统计学意义(P>0.05)。细胞培育48h,DCN单纯处理对HLE-B3细胞的凋亡率无影响,差异无统计学意义(P>0.05);高糖组细胞凋亡率明显高于正常对照组,DCN+高糖组细胞凋亡率明显低于高糖组,差异均有统计学意义(均P=0.000)。高糖组细胞内ROS平均荧光强度高于正常对照组,DCN单纯处理组ROS平均荧光强度较高糖组降低,差异均有统计学意义(均P=0.000)。高糖组总SOD酶活性比正常对照组和DCN单纯处理组低,差异均有统计学意义(P=0.007、0.004)。高糖组GSH/GSSG比值较正常对照组和DCN单纯处理组低,差异均有统计学意义(均P=0.000)。结论DCN可抑制高糖条件下HLE-B3的凋亡和氧化应激水平,为糖尿病性白内障的防治提供了依据。