缺氧对视网膜Müller细胞上水通道蛋白-4表达的影响

摘要

目的利用体外培养的视网膜Müller细胞,研究在缺氧条件下视网膜Müller细胞上水通道蛋白-4(AQP-4)表达的变化。方法采用组织块培养法从新西兰大白兔视网膜中获取Müller细胞,在含20%胎牛血清的DMEM培养液中原代培养,培养的细胞通过胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色及透射电子显微镜进行鉴定。取第2代细胞进行实验,将化学缺氧诱导剂CoCl2联合DMEM培养液培养24h的细胞作为缺氧组;将DMEM培养液单独培养24h的细胞作为对照组。采用免疫细胞化学法及半定量RT-PCR法分别检测2组Müller细胞上AQP-4蛋白及AQP-4 mRNA的表达。结果Müller细胞(第2代)上GFAP的阳性率为90%以上,细胞质染色呈棕色。细胞内含特征性的中间丝,细胞表面有微绒毛,细胞质内含丰富的细胞器。CoCl2联合DMEM培养液培养24h后Müller细胞上AQP-4蛋白的表达较对照组明显增加(t=6.74,P<0.05);AQP-4 mRNA的表达亦明显增加(t=21.79,P<0.05)。结论缺氧能增强Müller细胞上AQP-4的表达,进而使视网膜内液体的积聚增加。提示Müller细胞在糖尿病视网膜病变(DR)或增生性视网膜病变的视网膜水肿形成过程中起重要作用。