腺相关病毒介导的脑源性神经营养因子对DBA／2J小鼠视网膜神经节细胞的保护作用

摘要

背景神经营养因子的缺乏与青光眼的视神经损害密切相关。外源性神经营养因子的补充具有短暂的保护作用。腺相关病毒（AAV）介导的神经营养因子可在眼内长期表达，但是否对青光眼动物的视神经具有持久的保护作用有待研究。目的评估AAV介导的脑源性神经营养因子（BDNF）基因在DBA／2J小鼠眼内的表达及其对视网膜神经节细胞（RGCs）的保护作用。方法健康清洁级DBA／2J小鼠10只从4月龄起，每月使用Tonolab眼压计测量眼压。6月龄时左眼玻璃体腔内注射AAV介导的BDNF和绿色荧光蛋白（GFP）基因（AAV—BDNF—GFP）1μ1，右眼注射等量的生理盐水作为对照。注射后3个月心脏灌流后取出视网膜，荧光显微镜下观察GFP在视网膜中的表达，免疫组织化学法计算存活的RGCs数目并进行比较。结果DBA／2J小鼠4月龄时AAV—BDNF—GFP眼眼压平均为11．90mmHg，对照眼眼压为11．40mmHg。实验眼与对照眼眼压5月龄时均开始升高，8月龄时达到高峰。从4月龄到9月龄，实验组和对照组眼压比较差异无统计学意义（t=-1．78～0．61，P=0．11—0．90）。玻璃体腔注射AAV—BDNF—GFP3月龄后视网膜可以观察到GFP阳性细胞，转染率为46．33％±8．08％。AAV—BDNF—GFP组实验眼的平均RGCs的密度为（3168．13±1319．33）mm2，对照眼为（2024．81±796．38）mm2，差异有统计学意义（t=2．75，P=0．02）。结论AAV介导的BDNF对DBA／2J小鼠RGCs有保护作用。