间充质干细胞对大鼠实验性自身免疫性葡萄膜炎视网膜中白细胞介素17表达的影响

摘要

背景研究显示Th17细胞是实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）发病的重要致炎细胞群。而白细胞介素17（IL-17）作为Th17细胞的标志性因子参与了EAU的发生与发展。间充质干细胞（MSCs）作为一种免疫调节剂在多种自身免疫性疾病中对Th17具有抑制作用。目的研究MSCs对EAU的治疗作用以及对IL-17在大鼠视网膜表达的影响。方法从10只SPF级Wistar大鼠股骨骨髓中分离、培养MSCs并进行传代，第3—5代细胞用于实验。54只SPF级6—8周龄Lewis大鼠按随机数字表法分为实验组48只和正常对照组6只。光感受器间维生素A类结合蛋白（IRBP）与含有结核杆菌素HR37a的2．5g／L弗氏完全佐剂（CFA）等体积混合后行实验组大鼠单后足垫皮下注射建立EAU动物模型，然后按照分层随机原则分为模型对照组和MSCs治疗组，每组24只大鼠。MSCs治疗组于造模的同时行1mlMSCs尾静脉注射（5×10。个／m1），连续注射3d，模型对照组以同法注射等体积PBS。注射后每日在裂隙灯显微镜下观察大鼠眼部炎症反应，并根据Caspi临床分级进行评分。分别于造模后9、12、15、20d随机选取模型对照组和MSCs治疗组各6只大鼠制备视网膜切片，采用组织病理学方法观察大鼠视网膜形态学改变和炎症反应，参照Caspi组织学分级法进行评分。采用免疫组织化学染色法检测造模后9、12、15、20d大鼠视网膜中IL．17的表达。结果培养的细胞呈梭形生长，漩涡状排列，经流式细胞术鉴定CD29、CD44表达阳性，CD45、CD34表达阴性。MSCs治疗组造模后9、12、15、20d眼前节炎症反应评分均低于模型对照组（U=2．815，P=0．005；U=2．768，P=0．006；u=2．900，P=0．004；u=2．855，P=0．004），视网膜组织学检测炎症评分均低于模型对照组，差异均有统计学意义（U=2．345，P=0．019；U=2．559，P=0．011；U=2．166，P=0．030；U=2．373，P=0．018）。免疫组织化学染色显示，MSCs治疗组造模后9、12、15、20d大鼠视网膜IL-17蛋白阳性表达的平均吸光度（A）值分别为26．47±5．68、77．78±9．65、47．02±6．68和26．59±5．94，明显低于模型对照组的45．34-,4．63、105．95±10．74、64．11±9．76和37．02±6．51，差异均有统计学意义（t=6．305，P=0．000；t=4．799，P=0．001；t=3．540，P=0．005；t=2．900，P=0．016）。结论MSCs能减轻EAU的程度并抑制EAU的进展，降低了IL-17在眼组织中的表达。