超声处理对羊瘙痒病脑组织中PrPSc聚集状态的影响

摘要

目的研究超声处理对感染羊瘙痒症仓鼠脑组织中PrPSc聚集状态的影响,寻找产生PrPSc低聚体的条件.方法裂解液制备脑组织提取物,用各种超声条件处理不同阶段的脑组织提取物;以蛋白酶消化后的Western blot方法和图象分析系统观测prpsc蛋白的分布和聚集状态.结果适当的超声处理(15 s共30次)可增加脑组织匀浆上清中PrPSc含量1.29～1.58倍;同样条件下超声处理可明显增加羊瘙痒因子263 K感染仓鼠脑组织匀浆上清中PrP蛋白总量,而对正常对照仓鼠脑组织匀浆上清中PrP蛋白总量影响不大;对经常规高速离心获得的PrPSc的超声处理显示约90%的PrPSc存在于离心上清液中.结论对感染动物脑组织进行超声处理可增加PrPSc的提取量,利于实验室检测.适当的超声处理可破碎大的相对分子质量的PrPSc聚集物,产生小的相对分子质量的PrPSc产物.