大鼠β防御素2基因慢病毒载体的构建及功能检测

摘要

目的构建大鼠β防御素2（rBD2）基因慢病毒表达载体,并转染培养细胞检测其表达,为rBD2研究及大鼠体内实验奠定基础。方法提取大鼠上皮细胞总RNA,PCR扩增获得rBD2基因,双酶切PCR产物和慢病毒载体Lentivirus[含H1启动子和绿色荧光蛋白（GFP）],连接构成rBD2基因慢病毒表达载体LV-rBD2,行测序鉴定。用慢病毒包装系统对LV-rBD2进行慢病毒颗粒包装并梯度稀释法测定病毒滴度,病毒液感染培养细胞,RT-PCR和Western Blot检测rBD2表达。结果凝胶电泳和测序结果表明rBD2基因克隆到慢病毒载体中,序列正确。完成慢病毒颗粒包装,调整病毒滴度至1×105ifu/μl。RT-PCR和Western-Blot显示rBD2基因获得表达。结论 rBD2基因慢病毒表达载体LV-rBD2被成功构建,能转染细胞并获得有效表达。