聚合酶链反应和地高辛标记的核酸杂交技术用于钩端螺旋体的检测

摘要

目的为钩端螺旋体快速诊断和流行病学调查建立一种比较理想的方法。方法根据钩端螺旋体赖株DNA合成一对flaB引物,用PCR技术对钩端螺旋体菌株、疫区现场动物标本等进行flab基因扩增,用地高辛（DIG）标记,flaB基因探针,用琼脂糖凝胶电泳和斑点杂交技术进行检测。结果纯化钩端螺旋体DNA 5 pg经flaB-PCR扩增后,琼脂糖凝胶电泳可以目测。用DIG标记的flaB探针可以检测到5 fg及以下的DNA扩增产物。疫区70份蛙肾标本,分离细菌8株,阳性率11．43％。flab扩增阳性14份,阳性率20％;DIG标记探针斑点杂交检测,阳性19份,阳性率为27．14％。结论PCR-斑点杂交是一种灵敏、特异、快速的钩端螺旋体检测方法,既可用于快速检测和早期诊断,也可用于疫情监测和流行病学调查。