单周期复制的马传染性贫血病毒重组疫苗的构建

摘要

目的构建单周期复制的马传染性贫血病毒(EIAV)重组疫苗.方法将感染性EIAV分子克隆WU57囊膜(env)基因敲除,在pGPT中克隆4个拷贝的Mason Pfizer猴病毒组成性RNA转运因子(CTE),构建重组质粒pGPTC;构建另一表达Env蛋白的重组质粒pTEB,并分别与重组质粒pGPT、pGPTC共转染进入293细胞;以Western blot对转染细胞外培养液进行检测以鉴定病毒粒子的产生;通过免疫荧光分析鉴定感染细胞内病毒蛋白的表达.结果pGPTC/pTEB共转染的细胞外培养液中检测到特异性EIAV病毒蛋白,而pGPT/pTEB共转染的细胞外培养液中没有检测到特异性EIAV病毒蛋白.转染细胞产生的病毒粒子EIAVGPTC感染的原代马肾细胞(EK)内检测到病毒蛋白的表达,而用感染细胞产生的病毒粒子再感染EK细胞,则无病毒蛋白表达.结论Rev/RRE对于病毒结构蛋白的表达是必需的;CTE可以替代Rev蛋白功能辅助EIAV结构蛋白的表达;转染的293细胞产生了EIAV病毒粒子并分泌到胞外培养液中;产生的病毒粒子EIAVGpTC是一复制缺陷的活重组病毒.