马传染性贫血病毒

摘要： 转录因子E2相关因子2(Nrf2)是细胞重要的调节抗氧化应激的转录因子,其活性状态与病毒感染引起的炎症及免疫清除相关。为研究Nrf2对马传染性贫血病毒(EIAV)复制的影响,本研究通过CRISPR在线设计工具,靶向于Nrf2设计2条特异性sgRNAs,经程序性退火后连接到LentiCRISPRv2-GFP载体中构建重组质粒并分别经测序鉴定正确后,转染HEK293T细胞,24 h后通过western blot筛选沉默Nrf2基因效率最高的sgRNA,结果显示,2条sgRNAs均具有较高的沉默效率。将重组质粒LentiCRISPRv2-GFP-sgRNA-N1转染HEK293T细胞,利用流式细胞仪筛选表达GFP的单细胞克隆,并扩大培养后,经western blot和测序鉴定,筛选到2株不表达Nrf2的细胞,这2株细胞基因组均缺失一个碱基T,导致Nrf2基因发生移码突变而无法表达。选择其中一株细胞,将该细胞连续传代,选择第10代(G10)、15代(G15)、20代(G20)细胞经western blot鉴定其遗传稳定性,结果显示各代次细胞均未检测到Nrf2基因的表达,表明该敲除细胞系可稳定遗传,将其命名为HEK293T-Nrf2^(KO)细胞。将EIAV感染性克隆CMV_(3-8)及Nrf2基因回补的感染性克隆CMV_(3-8)+pVR_(1012)-flag-Nrf2分别转染HEK293T-Nrf2^(KO)细胞,24 h后收获细胞和上清,通过western blot分别检测细胞和上清中的病毒蛋白Gag及利用反转录酶活性试验(RT)检测上清中病毒的复制。western blot结果显示,与CMV_(3-8)转染的HEK293T细胞相比,转染CMV_(3-8)的HEK293T-Nrf2^(KO)细胞和上清中病毒蛋白Gag表达均上调约1.5倍,而转染CMV_(3-8)+pVR_(1012)-flag-Nrf2HEK293T-Nrf2^(KO)细胞和上清中的病毒蛋白Gag表达下调约50%;RT的检测结果与western blot的检测结果一致。结果表明Nrf2基因可以抑制EIAV在HEK293T细胞中的表达。通过将相关质粒转染HEK293T细胞包装EIAV假病毒,并将其分别感染HEK293T和HEK293T-Nrf2^(KO)细胞24 h后,分别检测病毒的荧光素酶信号,结果显示,与对照组相比,感染假病毒的细胞病毒复制能力显著增强。进一步表明,敲除Nrf2基因有助于病毒对细胞的感染。以上结果表明,Nrf2能够抑制EIAV在HEK293T细胞中的复制。本研究利用CRISPR/Cas9技术构建的敲除Nrf2基因的HEK293T细胞系,可以用于研究宿主Nrf2对EIAV复制的影响,本研究首次证实了宿主Nrf2可以抑制EIAV的复制。本研究构建的HEK293T-Nrf2^(KO)细胞系为宿主Nrf2调控EIAV复制机制的研究提供了有效工具。

摘要： 马传染性贫血病毒(EIAV)囊膜蛋白(Env)是参与病毒感染过程中的关键蛋白,由表面蛋白(Gp90)及跨膜蛋白(Gp45)组成,Env蛋白在介导病毒粘附、细胞间融合、疾病传播等方面发挥重要作用。为了通过单个B淋巴细胞扩增技术获得Env特异性单克隆抗体(MAb),本研究利用密码子优化后的Gp90基因构建了重组质粒pcDNA3.1-s-gp90-His,按常规方法将该重组质粒免疫小鼠6次后分离脾细胞,利用荧光激活细胞分选(FACS)技术分离免疫小鼠脾细胞中可识别Gp90的单个B淋巴细胞,结果显示,本研究从2×10^(8)个小鼠脾细胞中获得890个识别Gp90的单个B淋巴细胞。通过特异性引物以单个B淋巴细胞的基因组cDNA为模板扩增抗体重链(Ig VH)和轻链(Ig VL)的可变区基因,利用重叠延伸PCR方法分别将重链(Ig VH)和轻链(Ig VL)可变区基因克隆至pcDNA3.1中,测序鉴定结果显示分别正确构建了27对匹配的pcDNA3.1-VH和pcDNA3.1-VL表达质粒,将这27对匹配的表达质粒分别按照pcDNA3.1-VH:pcDNA3.1-VL=1:1的比例共转染至HEK293F细胞,收获细胞上清,经Protein A纯化获得Gp90 MAb。通过ELISA和western blot两种方法对纯化的Gp90 MAb进行鉴定,结果显示获得了27株可匹配的抗体基因对,经表达后有4株MAb可与Gp90蛋白结合,且可以识别Gp90蛋白的天然构象。本研究首次采用单个B淋巴细胞扩增技术对Gp90 MAb进行了筛选,获得的Gp90 MAb为Env蛋白检测方法的研究提供了物质基础,同时为深入研究Env蛋白的功能奠定了基础。

摘要： Rev蛋白是所有慢病毒属成员均具有的附属蛋白,它与病毒mRNA的特定序列结合,将编码病毒结构蛋白的mRNA运输至胞浆,从而促进病毒结构蛋白的表达,将Rev介导病毒mRNA核质运输的生物学功能简称为核输出活性。为建立马传染性贫血病毒(EIAV)附属蛋白Rev的核输出活性检测方法,本研究通过PCR方法克隆了EIAV的结构蛋白Gag-Pol编码区序列及Rev反应元件(RRE)序列,构建pGagpol-RRE表达载体,将其单独或与Rev表达载体(pcDNA-Rev _(FDDV)-HA)共转染HEK293T细胞后,通过western blot分析显示,pGagpol-RRE单独转染HEK293T细胞不表达,须在Rev的作用下才能在HEK293T细胞中表达,而且Gag的表达量随着Rev剂量(0.05μg、0.1μg、0.2μg)的增加而增加。在pcDNA-Rev _(FDDV)-HA的基础上,通过PCR方法将Rev核输出活性的关键位点L^(36)突变成A,构建突变的Rev表达载体pcDNA-Rev _(L36A)-HA,将其与pGagpol-RRE共转染HEK293T细胞后,经western blot检测结果显示,未检测到Gag的表达。上述结果表明表达载体pGagpol-RRE可以用于评价EIAV Rev的核输出活性。在此基础上,本研究将不同EIAV的Rev表达载体与pGagPol-RRE共转染HEK293T细胞,经western blot鉴定结果显示,不同EIAV的Rev均可以介导Gag-Pol的表达。上述结果表明,表达载体pGagpol-RRE转染细胞后经western blot检测Gag表达量的变化可以广泛用于评价不同EIAV Rev的核输出活性。本研究利用Rev与RRE结合介导Gag-Pol表达的原理首次建立了EIAV Rev核输出活性检测系统,为进一步研究Rev的生物学活性奠定了基础。

摘要： 马传染性贫血病毒(EIAV)属反转录病毒科慢病毒属成员,与人类免疫缺陷病病毒(HIV-1)等其他慢病毒属成员在基因组结构、复制分子机制、病毒形态、生活周期、免疫机理及与宿主相互作用等方面具有高度相似性。EIAV除了具有慢病毒的共性外,还有其独特之处。体现在EIAV感染的马在经历多次发热的病程后,大多数会转归为终身病毒携带的状态,且能对高致病力病毒的攻击产生一定的抵抗力。说明EIAV感染可以实现自身的免疫调控。

摘要： 为分析突触小泡磷酸酶2结合蛋白(SYNJ2BP)对马传染性贫血病毒(EIAV)复制的影响,本研究设计了2条靶向SYNJ2BP基因外显子的特异性sgRNA,将sgRNA插入plenti-CRISPRv2GFP载体获得重组质粒pSYNsgRNA1和pSYN-sgRNA2,将这2个重组质粒转染HEK293T细胞,通过流式细胞仪分选获得单克隆细胞株,测序结果显示SYNJ2BP基因产生插入突变,经western blot确认已敲除SYNJ2BP基因并稳定遗传,表明获得了SYNJ2BP敲除的HEK293T细胞系。将EIAV感染性克隆质粒CMV3-8分别转染SYNJ2BP敲除的HEK293T细胞系与野生型细胞,经western blot证实与野生型细胞相比敲除SYNJ2BP抑制了EIAV囊膜蛋白的表达,灰度值显示囊膜蛋白表达量降低50%。综上所述,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了SYNJ2BP敲除的HEK293T细胞系,并发现SYNJ2BP基因敲除后抑制了EIAV囊膜蛋白的表达,本研究为进一步分析SYNJ2BP调节EIAV复制的分子机制提供了参考依据。

摘要： In order to evaluate the neutralizing activity of the sera from the attenuated vaccine-immunized horses against the homologous and heterologous equine infectious anemia virus (EIAV) strains,pseudoviruses carrying different EIAV envelopproteins from EIAVFDDV3-8,EIAVLN,EIAVUK,or EIAVYN were rescued by transfecting the Env recombinant expression plasmids packaging plasmid (pUK-gag-pol),and transfer vector (pONYS.1) in 293T cells.The pseudoviruses were incubated with vaccine immunized horses' sera (5# and 8#),and then seeded in ELR1-293T cell monolayer.By detecting the luciferase activity in cells,the serum neutralization titer against different enveloped viruses was calculated.The results showed that the horse sera neutralized the pseudo-viruses at different levels,as the order declined:pVR1012-FDDV3-8-Env,pVR1012-LN-Env,pVR1012-UK-Env,and pVR1012-YN-Env.Further analysis proved that there was a negative correlation between the neutralization ability of vaccineimmunized sera and the variation level of different EIAV strains Env compared with that of EIAV vaccine strain (5#,R2=0.99;8#,R2=0.96).Although the ability to neutralize heterologous strains was lower than that of homologous strains,the sera still had strong neutralization activities on heterologous strains,indicating that the Chinese EIAV attenuated vaccine strains could inducebroad spectnum neutralization antibody against different strains.%为评价马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗免疫马血清对同源和异源病毒株的中和活性差异,本研究构建了不同EIAV株(EIAVFDV3-8、EIAVLN、EIAVUK和EIAVYN) Env的重组表达质粒,并将这些质粒与包装质粒(pUK-Gag-pol)及表达荧光素酶的转移质粒(pONY8.1)共转染293T细胞;将假病毒与疫苗免疫马(5#、8#)血清共孵育后接种于ELR1-293T细胞单层;通过检测细胞中荧光素酶活性,计算疫苗免疫马血清中和50％假病毒感染的血清稀释倍数,评价血清对病毒的中和活性.结果显示,疫苗免疫马血清对表达不同Env假病毒的中和滴度存在差异,从高到低依次是:pVR1012-FDDV-3-8-Env、pVR 1012-LN-Env、pVR1012-UK-Env、pVR 1012-YN-Env,而且免疫血清对不同病毒株的中和能力与不同病毒株Env的变异呈负相关(5#,R2=0.99;8#,R2=0.96).虽然免疫马血清中和异源病毒株的能力显著低于同源病毒株,但其对异源病毒株仍具有良好的中和作用,本研究结果表明中国EIAV弱毒疫苗可以激发抗不同病毒株的广谱中和抗体.

摘要： 为研究马传染性贫血病毒(EIAV)感染靶细胞-马单核巨噬细胞(eMDM)后细胞内microRNA (miRNA)表达的变化,本研究采用EIAV强毒株EIAVDLV34感染eMDM,并以未感染组作为对照,提取细胞内总RNA,通过高通量测序分析细胞内miRNA表达谱的变化.结果显示,与对照相比,感染EIAVDLV34后eMDM有16个miRNA发生差异表达,其中8个miRNA上调表达,8个miRNA下调表达,通过荧光定量PCR技术对这16个miRNA的表达进行了验证,结果与高通量测序一致,最后利用生物信息学方法对这16个miRNA的靶基因及其参与的生物学过程进行了分析,显示靶基因主要参与转录调控、信号转导、细胞凋亡等生物学过程.本研究为进一步分析EIAV与其宿主相互作用、致病机制以及慢病毒相关疾病的预防提供了参考依据.

摘要： 为探明2012-2013年贵州省紫云县马匹大量死亡的病因,为其科学防治提供参考,采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法对当地养殖的贵州矮马、西南马进行马传染性贫血病毒(Equine Infectious Anemia virus,EIAV)、马动脉炎病毒(Equine arteritis virus,EAV)和马疱疹病毒Ⅰ型(Equine herpesvirus type-1,EHV-1)3种病毒的抗体水平检测,并与伊犁马进行比较.结果表明:3个马群中均未检测到EIAV抗体,EHV-1抗体阳性率达98.15％～100％;与伊犁马相比,贵州矮马和西南马EAV抗体的阳性率较高,分别为48.15％和19.35％,并与2个马群的血液理化指标存在一定相关性.紫云县贵州矮马和西南马存在较高比例的EAV感染,马驹和虚弱马匹感染EAV后死亡率较高,因此推测EAV可能是导致马匹死亡的原因之一.

摘要： 为建立稳定表达马TRIM5α (eqTRIM5e)的HEK293细胞系,并检测马TRIM5α (eqTRIM5α)的抗病毒功能,本研究将eqTRIM5α克隆于慢病毒表达载体pLPCX中,构建重组质粒pLPCX-eqTRIM5α-HA,同时构建恒河猴的pLPCX-RhTRIM5α-HA作为阳性对照.利用VSV-G包装慢病毒,感染HEK293细胞,并利用嘌呤霉素筛选、纯化,建立了稳定表达eqTRIM5α和RhTRIM5α的HEK293细胞系.经western blot和流式细胞术鉴定,该细胞系传代至20代后,仍然能够检测到eqTRIM5α和RhTRIM5α的稳定表达.将该细胞系应用于抗马传染性贫血病毒(EIAV)活性研究中,结果显示eqTRIM5α同RhTRIM5α一样均能够抑制病毒复制,表明eqTRIM5α是一种对EIAV具有较强限制作用的宿主蛋白.该细胞系的建立为进一步评价和研究eqTRIM5α的抗病毒作用和机制奠定了基础.

摘要： 马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗是唯一成功应用的慢病毒弱毒疫苗,为慢病毒疫苗研究提供了独特模型.EIAV囊膜蛋白(Env)是病毒与靶细胞受体结合的主要区域,同时也是病毒的主要免疫原,与诱导中和抗体的产生密切相关.本研究对EIAV弱毒疫苗致弱过程中不同代次病毒env基因进行比较分析.，来源于致病毒株的Env ELRI-293T(表达EIAV受体ELRI293T细胞系)和驴胎皮肤细胞(FDD)的感染能力普遍低于弱毒株和疫苗株，而对马巨噬细胞的感染能力没有明显的差异。体外中和实验表明，致病毒株的Env对中和抗体的敏感性显著低于弱毒株和疫苗株。上述结果表明，EIAV弱毒疫苗致弱过程中的env的变异会影响病毒的感染能力和对中和抗体的敏感性。

摘要： 马传染性贫血病毒(EIAV)减毒活疫苗是我国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所自主研制成功的世界上第一个也是唯一的慢病毒疫苗，成功控制了该病在我国的流行。阐明明EIAV弱毒疫苗免疫保护机制和基因变异特点对HIV疫苗的研制有重要的指导意义。

摘要： 为了证明中国马传染性贫血病毒（ＥＩＡＶ）弱毒疫苗的长末端重复序列（ＬＴＲ）是否能够启动基因的表达，研究人员将该ＬＴＲ克隆于含ＣＡＴ基因的载体中，获得重组质粒ｐＣＡＴ－ＬＴＲ，用ｐＣＡＴ－ＬＴＲ分别转染驴胎皮肤细胞（ＦＤＤ）、胶质母细胞瘤（ＴＪ－９０５）细胞、驴白细胞及接种ＥＩＡＶ弱毒的ＦＤＤ及驴白细胞，结果以ＥＩＡＶ弱毒的ＬＴＲ为启动子，ＣＡＴ在这几种细胞中均获得了不同程度的表达，证实了中国ＥＩＡＶ弱毒株的ＬＴＲ在ＦＤＤ、ＴＪ－９０５及驴白细胞中确实具有一定的启动子功能，并能被反式激活表达，为进一步研究ＥＩＡＶ弱毒复制及表达调控奠定了基础。

摘要： 马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)引起马传染性贫血(简称马传贫),导致马持续性感染和反复病毒血症.为了探讨LTR在EIAV病毒复制和转录过程中的作用,并进一步研究EIAV的致病和免疫机制,本文用EIAV强毒L株LTR置换了以前构建的EIAV DLA(弱毒)感染性分子克隆中的LTR,构建了马传贫强/弱毒嵌合分子克隆,并获得了具有感染性的强/弱毒嵌合病毒.

摘要： 本研究应用已构建好的EIAV驴白细胞弱毒疫苗株的感染性分子克隆载体(pOK8266)为模板,通过SOE PCR方法在感染性分子克隆载体的S2基因独特区内引入突变点,形成含有酶切位点(NspV)的突变体(P1P4).将突变体(P1P4)亚克隆至pBluescript SK(M13-)质粒,形成pB-P1P4中间载体;人工合成两条六个组氨酸的引物,作为标签,将其插入pB-P1P4中间载体的NspV位点,形成带标签的中间载体;用ApaI酶切pOK8266和中间载体,连接转化,构建带标签的重组感染性分子病毒克隆载体(EIAV-p8.2-HIS),经PCR、酶切和测序表明,六个组氨酸已插入pOK8266的S2基因内.分别转染驴皮肤细胞(FDD)和驴白细胞,将转染驴皮肤细胞收获物传至第六代,电镜下未观察到EIAV病毒;而将转染驴白细胞收获物传代至第六代时,电镜下观察到了典型的病毒粒子.提取前病毒DNA,PCR扩增P1P4片段,亚克隆至pMD18-T载体,测序证明前病毒DNA含有六个组氨酸,从而在体外获得了感染性克隆病毒株.本研究通过SOE法巧妙地对S2基因引入突变,插入HIS标签,成功地获得了标记感染性分子克隆,证明S2基因缺失突变株在体外巨嗜细胞上培养不影响其复制力,为野毒株和疫苗毒的鉴别诊断打下基础.

摘要： 本研究应用已构建好的EIAV驴白细胞弱毒疫苗株的感染性分子克隆载体(pOK8266)为模板,通过SOE PCR方法在感染性分子克隆载体的S2基因独特区内引入突变点,形成含有酶切位点(NspV)的突变体(P1P4).将突变体(P1P4)亚克隆至pBluescript SK(M13-)质粒,形成pB-P1P4中间载体;人工合成两条六个组氨酸的引物,作为标签,将其插入pB-P1P4中间载体的NspV位点,形成带标签的中间载体;用ApaI酶切pOK8266和中间载体,连接转化,构建带标签的重组感染性分子病毒克隆载体(EIAV-p8.2-HIS),经PCR、酶切和测序表明,六个组氨酸已插入pOK8266的S2基因内.分别转染驴皮肤细胞(FDD)和驴白细胞,将转染驴皮肤细胞收获物传至第六代,电镜下未观察到EIAV病毒;而将转染驴白细胞收获物传代至第六代时,电镜下观察到了典型的病毒粒子.提取前病毒DNA,PCR扩增P1P4片段,亚克隆至pMD18-T载体,测序证明前病毒DNA含有六个组氨酸,从而在体外获得了感染性克隆病毒株.本研究通过SOE法巧妙地对S2基因引入突变,插入HIS标签,成功地获得了标记感染性分子克隆,证明S2基因缺失突变株在体外巨嗜细胞上培养不影响其复制力,为野毒株和疫苗毒的鉴别诊断打下基础.

摘要： 本研究应用已构建好的EIAV驴白细胞弱毒疫苗株的感染性分子克隆载体(pOK8266)为模板,通过SOE PCR方法在感染性分子克隆载体的S2基因独特区内引入突变点,形成含有酶切位点(NspV)的突变体(P1P4).将突变体(P1P4)亚克隆至pBluescript SK(M13-)质粒,形成pB-P1P4中间载体;人工合成两条六个组氨酸的引物,作为标签,将其插入pB-P1P4中间载体的NspV位点,形成带标签的中间载体;用ApaI酶切pOK8266和中间载体,连接转化,构建带标签的重组感染性分子病毒克隆载体(EIAV-p8.2-HIS),经PCR、酶切和测序表明,六个组氨酸已插入pOK8266的S2基因内.分别转染驴皮肤细胞(FDD)和驴白细胞,将转染驴皮肤细胞收获物传至第六代,电镜下未观察到EIAV病毒;而将转染驴白细胞收获物传代至第六代时,电镜下观察到了典型的病毒粒子.提取前病毒DNA,PCR扩增P1P4片段,亚克隆至pMD18-T载体,测序证明前病毒DNA含有六个组氨酸,从而在体外获得了感染性克隆病毒株.本研究通过SOE法巧妙地对S2基因引入突变,插入HIS标签,成功地获得了标记感染性分子克隆,证明S2基因缺失突变株在体外巨嗜细胞上培养不影响其复制力,为野毒株和疫苗毒的鉴别诊断打下基础.

摘要： 本发明公开了一种检测鸡马立克氏病病毒和鸡传染性贫血病病毒的多重免疫荧光分析引物、试剂盒及方法。本发明操作简单，通过PCR获得目标扩增片段，然后将扩增产物、荧光编码微球和链霉亲和素‑藻红蛋白进行杂交，然后通过检测仪读取MFI值，分辩不同类型的病原。本发明方法，能够同时检测鉴别鸡传染性贫血病毒和鸡马立克氏病病毒，而且具有特异性强，灵敏度高，重复性好等优点，可实现同一样本中的多种不同目的分子同时进行检测。本发明灵活性好，可以根据需要在此基础上加减检测病原的种类。

摘要： 衍生自含有缺失gag基因的非灵长类动物慢病毒基因组的逆转录病毒载体，其中gag中的缺失除去了gag编码序列中核苷酸350下游的一个或多个核苷酸。

摘要： 本发明公开了一种检测鸡马立克氏病病毒和鸡传染性贫血病病毒的多重免疫荧光分析引物、试剂盒及方法。本发明操作简单，通过PCR获得目标扩增片段，然后将扩增产物、荧光编码微球和链霉亲和素‑藻红蛋白进行杂交，然后通过检测仪读取MFI值，分辩不同类型的病原。本发明方法，能够同时检测鉴别鸡传染性贫血病毒和鸡马立克氏病病毒，而且具有特异性强，灵敏度高，重复性好等优点，可实现同一样本中的多种不同目的分子同时进行检测。本发明灵活性好，可以根据需要在此基础上加减检测病原的种类。

摘要： 衍生自含有缺失gag基因的非灵长类动物慢病毒基因组的逆转录病毒载体，其中gag中的缺失除去了gag编码序列中核苷酸350下游的一个或多个核苷酸。

摘要： 衍生自含有缺失gag基因的非灵长类动物慢病毒基因组的逆转录病毒载体,其中gag中的缺失除去了gag编码序列中核苷酸350下游的一个或多个核苷酸。

摘要： 本实用新型的马传染性贫血病病毒抗体快速定量检测系统，包括：层析检测卡、层析扫描仪、接收端，层析检测卡包括外壳、试纸卡、用于承托试纸卡的承托装置，承托装置可拆卸地安装在外壳内，外壳的上表面设置有观测孔，观测孔与承托装置上的试纸卡的硝酸纤维素膜上的检测线和质控线相对应，外壳的侧面上设置有用于承托装置进出外壳的插入孔。本实用新型对于实现实时快速监测和评价疫苗免疫效果，制定科学防控策略及评价动物群体抗病毒感染能力具有重要的意义，该技术将极大提高我国马传染性贫血病防控检测水平和能力。本实用新型的马传染性贫血病病毒抗体快速定量检测系统的试纸卡由外壳的侧面进出外壳，这样更换试纸卡简单，节省时间，使检测效率变高。

摘要： 本发明公开了一种检测马传染性贫血病毒代表毒株的无污染式试剂盒，包括试剂盒主体，所述试剂盒主体的一端安装有十字锁扣，所述试剂管架的中间位置处安装有抓取板，所述抓取板靠近顶端的内部安装有抓取槽，所述预留槽内部的一端设置有防护结构。本发明通过将U型板先进行一定的安装处理，并且在下半通孔的位置处对定型柱进行最终的限位工作，因此当其防护挡板收进U型板的内部后，将其试剂管架平稳放进放置槽的内部，然后将其定型柱再次取出，抓取防护挡板使其平稳移出，然后在同样的操作下使其防护挡板与稳固条相互配合进行一定的限位稳固工作，因此在其工作的过程中很好的提高了其整体的稳固能力，从而提高了其工作过程中的安全性。

摘要： 本发明公开了一种马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus,EIAV)荧光PCR检测试剂盒及其应用。所述的检测试剂盒中含有用于特异性检测马传染性贫血病毒的引物和探针。相较于现有的检测方法，使用本发明的试剂盒能够检测到更多的EIAV毒株，具有广谱性的特点，而使用OIE推荐的引物探针组合仅能检测到美洲毒株EIAVUK3及其序列相似的毒株。并且本发明的试剂盒灵敏度高、特异性好，检测毒株范围广。本发明的提出为马传染性贫血病毒的检测提供了一种更为有效的技术手段。

摘要： 本发明公开了一种马传染性贫血病毒p26‑gp90重组蛋白，属于动物病毒抗体检测领域。所述重组蛋白包括SEQ ID NO.1所示氨基酸序列或由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列组成。本发明还进一步公开了所述重组蛋白的基因，包含所述基因的载体和宿主细胞，以及所述重组蛋白的其制备方法和在检测马传染性贫血病毒的抗体中应用。利用本发明的重组蛋白检测马传染性贫血病毒抗体，方便快捷，灵敏度高，与其他病原体无交叉反应，特异性强，具有巨大的临床意义和和广泛的应用前景。

摘要： 本发明属于病毒检测技术领域，具体公开一种马传染性贫血病毒快速检测方法，包括以下步骤：制备琼脂板；打孔：采用多排多孔型方式打孔，并在琼脂板最薄处打孔作为衡量孔，用来衡量琼脂板每孔所需加液量；封板：将打孔后的琼脂板放入沸水中封板；加样：在衡量孔内加满生理盐水但不溢出，得到琼脂板上每孔的加液量，在琼脂板上的其它孔内加入与加液量相同的被检血清、阳性血清及抗原；扩散：将加好样的琼脂板进行扩散反应，观察结果。本发明提供的马传染性贫血病毒快速检测方法，不但减少了检测时间及人力和物力的投入，而且能够使试验结果更加准确可靠，同时能够满足大批量的实验室检测要求。