Vaspin通过Wnt/β-catenin信号通路促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化

摘要

目的观察vaspin对体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖及成骨分化的影响及其潜在机制。方法采用全骨髓法分离培养4周龄SD大鼠的BMSCs。成骨诱导液联合不同浓度vaspin（10、50、100 ng/m1）作用于BMSCs,分别于24、48、72 h采用CCK8法检测细胞增殖水平;于第7天用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测ALP、Runx2、β-cateninmRNA表达水平,Western印迹法检测β-catenin、Runx2蛋白表达水平。21天采用茜素红染色矿化结节及定量检测;在100 ng/ml vaspin中加入Wnt通路特异性阻断剂DKK1（1μg/ml）后,RT—PCR及Western印迹法再次检测上述指标表达水平。结果 Vaspin对大鼠BMSCs增殖无显著影响（P＞0.05）,可上调促进BMSCs成骨分化基因ALP、Runx2及β—catenin mRNA表达及β—catenin、Runx2蛋白表达,茜素红染色矿化结节呈红棕色且增多,定量检测OD值,vaspin组高于对照组（P＜0.05）。加入阻断剂DKK1后ALP、Runx2及β—catenin mRNA表达水平均显著下降（均P＜0.05）,Runx2及β-catenin蛋白表达水平亦显著下降。结论 Vaspin可通过Wnt/β-catenin信号通路促进BMSCs成骨分化。