亚砷酸钠诱导大鼠肝星状细胞的激活及对DNA甲基转移酶1、3a mRNA表达的影响

摘要

目的观察不同剂量亚砷酸钠对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）纤维化的影响,及其纤维化后DNA甲基转移酶（DNMT）1、DNMT3a mRNA的表达情况。方法 HSC-T6细胞分别暴露于终浓度为0（对照）、5（低剂量）、15（中剂量）、25（高剂量）-μmol/L的亚砷酸钠培养基中培养24、48、72 h。收取细胞和细胞培养上清液。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定细胞培养上清液中纤维化因子I型胶原（COL-1）、Ⅲ型胶原（COL-3）、α平滑肌肌动蛋白（α-SAM）的含量,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测细胞DNMT1、DNMT3a mRNA的表达。结果不同染砷时间（24、48、72 h）对HSC-T6细胞COL-1、COL-3、α-SMA含量的影响差异均有统计学意义（F=249.574、328.493、3 157.436,P均＜0.01）;不同染砷含量（低、中、高剂量组）对HSC-T6细胞COL-1、COL-3、仪-SMA含量的影响差异均有统计学意义（F=3 946.521、1 006.399、13 025.770,P均＜0.01）。染砷24、48 h,高剂量组DNMT1 mRNA的表达（4.33±0.24、2.34±0.43）高于对照组（1.00±0.00、1.00±0.00,P均＜0.05）;低、中、高剂量组DNMT1 mRNA的表达随染砷时间延长而下降（P均＜0.05）。染砷48、72 h,高剂量组DNMT3a mRNA的表达（2.23±0.50、5.02±0.23）高于对照组（1.00±0.00、1.00±0.00,P均＜0.05）;中、高剂量组,染砷72 h DNMT3a inRNA的表达（3.80±0.14、5.02±0.23）均高于24 h（3.03±0.12、0.42±0.15,P均＜0.05）。结论亚砷酸钠对HSC-T6细胞具有明显的活化和促纤维化作用,肝纤维化后DNMT1、DNMT3a mRNA的表达水平均上调。