Fas相关死亡结构域蛋白增强5-氟尿嘧啶抑制结肠癌细胞生长作用的研究

摘要

目的通过体外和体内实验研究结肠癌细胞在稳定转染Fas相关死亡结构域蛋白（FADD）基因后对5-氟尿嘧啶的敏感性,探讨FADD基因与5-氟尿嘧啶联合治疗结肠癌的可行性。方法①RT-PCR和Western印迹法检测稳定转染FADD基因的结肠癌细胞SW480/FADD、稳定转染空载体的结肠癌细胞SW480/neo和正常结肠癌细胞SW480中FADD基因的mRNA和蛋白表达水平。②MTT法检测3种细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性。TUNEL法和流式双染法检测细胞凋亡率。Western印迹法检测caspase-8和caspase-3的表达。③裸鼠成瘤实验观察瘤体生长曲线,病理学和TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果①SW480/FADD细胞FADD基因mRNA和蛋白表达水平明显较SW480和SW480/neo增高（P＜0.05）。②5-氟尿嘧啶对SW480/FADD的抑制率明显高于SW480和SW480/neo,差异有统计学意义（P＜0.05）。③5-氟尿嘧啶（10 mg/L）干预48 h后,SW480/FADD凋亡率达（33.3±4.5）%,与SW480[（13.9±3.2）%]和SW480/neo[（14.1±3.4）%]间差异有统计学意义（P＜0.05）。④5-氟尿嘧啶（10 mg/L）干预48 h后,SW480、SW480/neo的procaspase-8和procaspase-3表达比SW480/FADD增高,而cleaved caspase-8和cleavedcaspase-3的表达比SW480/FADD降低（P＜0.05）。⑤SW480/FADD对5-氟尿嘧啶更加敏感,瘤体体积增加幅度明显小于SW480和SW480/neo,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论稳定转染FADD基因可明显增加结肠癌细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性,二者联合应用在结肠癌治疗中有潜在的价值。