不同剂量中波紫外线对HaCaT细胞p62及自噬体形成关键基因Beclin-1、Atg12和Atg3的调控效应研究

摘要

目的探讨不同剂量中波紫外线（UVB）照射培养的HaCaT细胞后不同时间点对p62、Beclin-1、Atg12和Atg3蛋白表达水平的调控效应。方法使用4.5、10和50 mJ/cm~2 UVB照射HaCaT细胞,照射后加入新鲜培养基继续培养4 h和12 h,同时设相同处理但不照射UVB的细胞为对照细胞。另设观察组,在照射后立即（包括对照细胞）,使用含蛋白酶抑制剂E64D（10μg/L）和胃酶抑素（10μg/L）的培养基孵育4 h和12 h,以阻断对p62的降解。使用Western印迹法测定HaCaT细胞p62、Beclin-1、Atgl2和Atg3蛋白的表达水平。结果 50 mJ/cm~2 UVB照射HaCaT细胞后4 h,p62表达水平（p62与内参的比值为0.473±0.022）较对照细胞（0.246±0.038）升高（t=15.27,P＜0.05）;阻断溶酶体后,细胞新生p62的水平（0.445±0.035）与阻断溶酶体的对照（0.244±0.016）相比,仍为上调（t=7.62,P＜0.05）。在4.5 mJ/cm~2 UVB照射细胞后12 h,与对照（0.254±0.035）相比,HaCaT细胞p62表达上调（0.497±0.047,t=22.89,P＜0.05）;阻断溶酶体后,与阻断溶酶体的对照（0.257±0.025）相比,p62表达水平仍然上调（0.548±0.051,t=17.42,P＜0.05）。4.5 mJ/cm~2和50 mJ/cm~2UVB照射后4 h和12 h,对照细胞和照射细胞间的Beclin-1、Atg12和Atg3的表达差异均无统计学意义（P＞0.05）,阻止溶酶体对自噬体内容物的降解也未能发现Beclin-1、Atg12和Atg3的表达差异（P＞0.05）。结论p62表达在不同剂量UVB照射和照射后不同时间存在差异调控,并且这种调控效应与自噬体形成可能没有生物学联系。