川芎嗪对UVA诱导人皮肤成纤维细胞衰老的拮抗作用及MMP-1、MMP-3 mRNA表达影响

摘要

目的探讨川芎嗪对长波紫外线（UVA）诱导人皮肤成纤维细胞（HDF）衰老的拮抗作用及对基质金属蛋白酶（MMP）-1和MMP-3 mRNA表达的影响。方法酶消化法分离HDF进行原代培养, 用不同浓度川芎嗪分别作用UVA多次照射前后的HDF。CCK-8法检测川芎嗪作用24、48、72 h或川芎嗪预处理24 h进行多次UVA照射的各组HDF体外增殖情况。光学显微镜下观察经多次UVA照射的各组细胞形态变化及β半乳糖苷酶染色情况, 实时荧光定量PCR检测各组细胞内MMP-1和MMP-3 mRNA相对表达量。结果浓度为20、50 mg/L的川芎嗪作用HDF 24、48、72 h对细胞的体外增殖活性无促进或抑制作用, 但100 mg/L作用48 h对HDF出现短暂抑制作用, 与未给药组比较细胞增殖活性差异有统计学意义（P＆ 0.05）。20、50、100 mg/L的川芎嗪预处理HDF 24、48、72 h对经多次UVA照射的HDF体外增殖均有一定的促进作用, 各组间细胞增殖活性在3个时间点差异有统计学意义（F值分别为17.451, 15.231, 23.535, 均P＆ 0.01）。多次UVA照射后HDF形态出现体积变大、颗粒增加及β半乳糖苷酶表达增加等衰老现象, 接近复制性衰老的HDF（P55组）。而20、50、100 mg/L的川芎嗪预处理HDF 24 h可减轻这种衰老现象, 其中UVA组β半乳糖苷酶阳性率（68.417 ± 1.181）%, UVA+川芎嗪20 mg/L组（58.167 ± 5.620）%, UVA+川芎嗪50 mg/L组（45.167 ± 5.502）%, UVA+川芎嗪100 mg/L组（43.000 ± 2.000）%, 未照射组（33.667 ± 5.865）%, P55组（76.000 ± 6.557）%, 各组间差异有统计学意义（F= 45.918, P＆ 0.01）, 且UVA+各浓度川芎嗪组、未照射组与UVA组比较差异有统计学意义（均P＆ 0.05）。川芎嗪可降低多次UVA照射诱导的HDF表达MMP-1和MMP-3 mRNA, 且UVA+各浓度川芎嗪组、未照射组与UVA组比较差异有统计学意义（均P＆ 0.05）。结论川芎嗪对多次UVA照射诱导的HDF衰老有拮抗作用, 并能降低HDF衰老过程中MMP-1和MMP-3 mRNA的表达。