牙龈卟啉单胞菌FtsZ第322位的甘氨酸在细胞分裂中的作用

摘要

目的:探讨牙龈卟啉单胞菌FtsZ(PgFtsZ)第322位的甘氨酸在细菌细胞分裂过程中的作用.方法:通过site-directed mutagenesis技术,采用megaprimer方法,使用三个引物进行两轮的PCR,构建PgFtsZ第322位甘氨酸的点变异型质粒pYW9(ZG322P,携带PgFtsZ第322位甘氨酸由脯氨酸取代的点变异型基因)和pYW10(ZG322H,携带PgFtsZ第322位甘氨酸由组氨酸取代的点变异型基因),然后将质粒pYW9、pYW10和pEZ1(携带野生型PgFtsZ的基因)分别转化到Escherichia coli BL21(DE3)pLysS中进行表达、分离和纯化目的蛋白质.同时将载体pET3a也转化到E.coli BL21(DE3)pLysS中作为阴性对照.进一步通过免疫印迹法鉴定构建的点变异型ZG322P和ZG322H.E.coli的形态通过显微镜观察.结果:野生型PgFtsZ的过表达导致E.coli细胞分裂的明显抑制,含质粒pEZ1的E.coli和仅含有载体作为对照的E.coli相比延长大约20倍.然而点变异型ZG322P和ZG322H的过表达并未引起E.coli细胞分裂的抑制,即含质粒pYW9的E.coli和含质粒pYW10的E.coli表现出正常的形态,与仅含有载体作为对照的E.coli细胞的形态相似.免疫印迹分析表明野生型PgFtsZ、点变异型ZG322P、ZG322H在相同位置出现阳性带,并且表达水平相似.结论:牙龈卟啉单胞菌FtsZ第322位的甘氨酸在细菌细胞分裂中起着重要的作用.