结核分枝杆菌热休克蛋白Hsp16.3及其合成肽在小鼠体内诱导的免疫应答

摘要

目的比较结核分枝杆菌Hsp16.3和Hsp16.3合成肽在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力。方法80只BALB/c小鼠随机分5组共免疫3次,间隔2周。分别于0、2、4、6、8周采集血液,ELISA法检测在抗原Hsp16.3和Hsp16.3合成肽包被时血清中的抗体浓度及第8周时血清中的抗体滴度。末次免疫完成后4周,取每组8只免疫小鼠分离脾淋巴细胞,用Hsp16.3和Hsp16.3合成肽分别刺激后,MTT法测定脾淋巴细胞的增殖指数,夹心ELISA法检测同样抗原刺激下脾淋巴细胞诱生的IFN-γ水平。每组剩余小鼠用H37Rv毒株攻击,4周后取小鼠脾脏分离脾淋巴细胞,倍比稀释后涂平板,3周后计数CFU。结果抗Hsp16.3和Hsp16.3合成肽的抗体在免疫的前4周均增长迅速,而后趋于缓和。Hsp16.3/DDA/MPL、Hsp16.3合成肽/DDA/MPL、Hsp16.3合成肽/FIA、BCG组和生理盐水组在第8周时抗Hsp16.3的抗体滴度分别为1:3000、1:1500、1:1500、1:500和1:100,抗Hsp16.3合成肽的抗体滴度分别为1:2000、1:2000、1:1000、1:500和1:100;在Hsp16.3和其合成肽的刺激下,各组平均刺激指数分别为(3.13±0.18)和(2.895±0.13)、(3.21±0.21)和(3.54±0.2)、(2.395±0.15)和(3.125±0.12),(1.67±0.12)和(1.93±0.14),(1.04±0.09)和(1.16±0.08);在同样抗原刺激下,各组诱生的IFN-γ水平分别为(182.43±6.01)pg/mL和(182.43±8.67)pg/mL、(193.522±9.26)pg/mL和(198.915±6.16)pg/mL、(179.135±7.83)pg/mL和(188.32±5.13)pg/mL,(274.56±10.26)pg/mL和(283.47±6.19)pg/mL,(71.14±3.34)pg/mL和(72.91±2.45)pg/mL;各组脾脏的荷菌数分别为(6.74±0.14)、(6.60±0.13)、(6.81±0.28)、(5.95±0.17)和(7.82±0.21)。结论二者在免疫学特性方面各有优势,提示Hsp16.3和Hsp16.3合成肽均有望成为TB疫苗的候选组分。