犬传染性肝炎核酸疫苗的构建及免疫效果评价

摘要

目的获得犬传染性肝炎保护性抗原Loop重组蛋白及pVAX1-CpG-Loop重组质粒,并评价其诱导特异性免疫应答的水平。方法PCR扩增犬腺病毒Ⅰ型抗原表位Loop基因,构建至原核表达载体pET28a(+)和真核表达载体pVAX1-CpG(+)中;pET28a-Loop重组质粒转化BL21(DE3),表达蛋白经SDS-PAGE、免疫印迹分析、亲和层析纯化抗原蛋白,采用肌内注射、电转导方法,prime-boost免疫策略,pVAX1-CpG-Loop重组质粒股四头肌注射免疫小鼠,抗原蛋白加强免疫后进行免疫效果的评价。结果ELISA方法检测到免疫鼠体内有特异性抗体产生,淋巴细胞增殖实验(MTT和CCK-8)、细胞因子和CD4+、CD8+分子测定表明DNA疫苗可以诱发TH1型免疫;中和实验表明表达蛋白诱导小鼠产生的抗体具有中和病毒的作用。结论构建的犬传染性肝炎pVAX1-CpG-Loop核酸疫苗具有诱导特异性细胞和体液免疫应答的能力。