生物钟蛋白REV-ERB激动剂对人胰腺癌细胞PANC-1的杀伤作用及机制研究

摘要

目的研究生物钟蛋白REV-ERB激动剂SR9009对人胰腺癌细胞PANC-1的杀伤作用及其潜在机制。方法将处于对数生长期的人胰腺癌PANC-1细胞,分别用0,6.25×10^(-1),1.25,2.5,5,10,20μmol·L^(-1)REV-ERB激动剂SR9009处理。处理72 h后以细胞计数法-8(CCK-8)法检测人胰腺癌细胞的活力;用流式细胞术分析细胞凋亡的情况;用蛋白质印迹法检测不同浓度的SR9009作用于PANC-1细胞后细胞凋亡和自噬相关蛋白的表达情况。SR9009作用于PANC-1细胞时,分为加泛胱天蛋白酶(caspase)抑制剂z-VAD-fmk组和不加z-VAD-fmk组,通过CCK-8法检测PANC-1细胞活力的变化。结果0,6.25×10^(-1),1.25,2.5,5,10,20μmol·L^(-1) SR9009组作用于PANC-1细胞72 h后,PANC-1的细胞活力分别为(100.02±4.79)%,(100.26±2.18)%,(79.12±2.64)%,(61.44±1.98)%,(55.34±2.30)%,(28.05±1.56)%,(22.31±1.94)%,细胞活力下降呈明显浓度依赖;流式细胞术说明人胰腺癌细胞凋亡率增加;蛋白质印迹实验表明caspase 3剪切蛋白的表达随着作用浓度升高而上调,自噬相关蛋白5(ATG5)随着SR9009作用浓度的升高而降低,自噬相关蛋白P62随着SR9009作用浓度的升高而表达增加。CCK-8实验表明加入z-VAD-fmk后,SR9009诱导的细胞毒性被削弱。结论生物钟蛋白REV-ERB激动剂对人胰腺癌细胞PANC-1有显著的抗肿瘤作用,这种作用可能是通过诱导caspase依赖的细胞凋亡和抑制细胞自噬实现的。