分时同步循环半定量RT-PCR检测胃癌细胞E-钙粘附素表达的方法学建立

摘要

目的:探索建立分时同步循环法分管半定量RT-PCR体系,并检测不同分化程度胃癌细胞中E-钙粘附素的相对表达量.方法:以胃癌细胞株HGC-27、MKN45、SCG-790为标本,抽提总RNA,合成第一链cDNA,优化PCR反应条件,建立分时同步循环法分管半定量RT-PCR反应体系,检测比较E-Cad的相对表达量.结果:采用LoTemp PCR全息反应液优化,退火温度为85℃,循环数为33,分时同步循环数为8.检测得胃癌细胞的E-Cad表达量与分化程度成负相关,符合试验预期.结论:分时同步循环法分管半定量RT-PCR能克服同管竞争及平台期对试验的影响,理论上减少了试验误差,可以用以胃癌细胞E-Cad表达量的初步检测.