活化B淋巴细胞与人骨肉瘤融合的制备及其对体外免疫原性的影响

摘要

目的：研究人骨肉瘤抗原进入提呈细胞的有效途径和方法。探索筛选制备人骨肉瘤与活化B淋巴细胞融合瘤的方法。并研究其体外免疫原性和作为人骨肉瘤免疫疫苗的可能性。为进一步临床应用做有意义的前期实验。方法：抗人Ig-M，金黄色葡萄球菌A蛋白及少量IL－2和PMA活化的人脾脏来源B淋巴细胞，以500mg/ml聚乙二醇为融合剂，使骨肉瘤细胞与活化B淋巴细胞进行化学融合，贴壁后去除未融合淋巴细胞，特异性抗B细胞抗体预包被产板捕捉与B细胞融合的骨肉瘤，条件培养基体外筛选扩增，检测融合效率，紫外线灭活，同时设单纯灭活的未融合的骨肉瘤组作为对照，记数法测量各组刺激淋巴细胞增殖能力，各组培养所得淋巴细胞进行体外杀伤实验（效靶比50：1），改良MTT法测量淋巴细胞对亲源之骨肉瘤细胞的杀伤指数。结果：人B淋巴细胞体外激活后可以与人骨肉瘤细胞化学融合，可利用贴壁性质和特异性B淋巴细胞抗体等方法部分纯化融合细胞并适当扩增浓集，融合细胞于3周和4周表达B淋巴细胞的标志性抗原效率分别为60．5％和45．4％。紫外线灭活融合瘤明显提高其体外刺激淋巴细胞增殖能力（P＜0．01），诱发淋巴细胞对亲源骨肉瘤细胞的杀伤作用（11．60％且P＜0．01），结论：利用人骨肉瘤细胞和活化B淋巴细胞可以制备融合瘤，融合瘤显著提高亲源骨肉瘤的体外免疫原性，引发体外抗瘤免疫，这提示利用细胞融合方法快速构建人骨肉瘤与B细胞融合瘤的瘤苗方案也是简便有效的，可能成为现实的个体化肿瘤疫苗新方案。