环指蛋白157通过下调小凹蛋白-1表达参与ERK通路激活促进黑素瘤细胞增殖

摘要

目的探讨环指蛋白157(RING finger protein 157,RNF157)在黑素瘤细胞增殖中的作用及相关机制。方法采用慢病毒转染技术构建RNF157过表达黑素瘤细胞株,小干扰RNA(siRNA)技术构建敲减RNF157的黑素瘤细胞株,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western印迹实验验证转染效果。采用MTT实验、克隆形成实验检测RNF157过表达黑素瘤细胞和敲减RNF157黑素瘤细胞的细胞增殖能力。采用裸鼠皮下成瘤实验及免疫组化染色检测RNF157过表达黑素瘤细胞体外增殖能力。采用免疫共沉淀(Co-IP)结合质谱分析、蛋白质组学和泛素化组学,探究RNF157在ERK通路中的潜在作用机制。结果免疫组化染色结果显示,RNF157在黑素瘤组织中的表达高于瘤旁组织(P<0.01)。qRT-PCR和Western印迹实验结果显示,过表达组的RNF157表达水平显著高于对照组(P<0.0001);si3转染效率最高,si3组的RNF157表达水平显著低于对照组(P<0.01)。MTT实验、克隆形成实验结果显示,RNF157过表达可促进黑素瘤细胞增殖,敲减RNF157抑制黑素瘤细胞增殖。进一步检测发现,RNF157过表达可以激活黑素瘤细胞的ERK通路。Co-IP结合质谱分析、蛋白质组学和泛素化组学结果显示,RNF157可结合小凹蛋白-1(caveolin-1,CAV1)并下调其表达水平,从而调控ERK通路。结论RNF157可促进黑素瘤细胞的体内外增殖;在黑素瘤细胞中,RNF157可能通过结合并下调CAV1表达水平,参与细胞内ERK通路激活。