半胱氨酸蛋白酶抑制剂C重组蛋白的制备

摘要

目的构建半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)原核表达载体,用以快速获取低成本、高浓度、高纯度的CysC纯化蛋白,为制备应用于临床实验室检测的CysC标准物质和质控品奠定基础。方法用Codon Adaptation Tool将人的CysC编码序列优化为大肠杆菌偏好的密码子序列,再将合成的DNA片段克隆至pET-28a(+)原核表达载体。将重组CysC表达质粒转化至E.coli BL21感受态中,优化诱导表达条件、确定最优表达条件组合及有效表达序列,并用融合标签对重组蛋白进行纯化。结果成功构建重组CysC原核表达质粒,明确CysC表达序列,确定异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达浓度、诱导温度等条件,纯化的CysC蛋白可通过临床检测,且稀释倍数与检测浓度间呈现线性关系。结论成功构建重组CysC的高效原核表达系统,重组CysC蛋白纯度大、浓度高、生产周期短,有望为CysC标准物质和质控品的制备提供物质基础。