酶法测定尿液草酸和枸橼酸的方法学性能验证及分析前影响因素研究

摘要

目的 为了保证检测结果的可比性并规范尿液前处理过程,对酶法检测尿液草酸和枸橼酸的试剂盒进行性能验证及分析前影响因素研究.方法 参考相关行业标准,对草酸和枸橼酸酶法试剂盒进行精密度、正确度、线性范围及干扰的性能验证.分析前影响因素研究包括:不加防腐剂,比较在室温、4°C和-20°C条件下放置不同时间的草酸和枸橼酸浓度;按照不同比例(100:1,50:1)、在不同时间(收样即刻,收样24 h后,冻存标本检测前)加入6 mol/L HCl酸化尿液对草酸和枸橼酸浓度的影响.结果 在低浓度下,草酸和枸橼酸的重复性(以CV表示)为0.92％和1.41％,实验室内不精密度为1.79％和1.75％,偏倚为-1.77％和-2.68％;在高浓度下,草酸和枸橼酸的重复性(以CV表示)为0.32％和0.91％,实验室内不精密度为1.20％和3.14％,偏倚为-0.81％和-4.62％.草酸在1.65～210.71 mg/L范围内线性良好(Y=0.993X-0.216,R2=0.999);枸橼酸在0.19～17.85 mmol/L范围内线性良好(Y=0.953X+0.044,R2=0.999).血红蛋白对草酸检测干扰较大,1 g/L以下时无干扰,2 g/L以上有明显负干扰;总蛋白低于1.5 g/L时对草酸和枸橼酸均没有干扰.不加任何防腐剂,尿液在室温、4°C及-20°C保存后,草酸浓度显著降低,枸橼酸浓度保持稳定.在尿液收集即刻和收集后24 h,按照50:1的比例加入6 mol/L HCl,草酸和枸橼酸浓度无显著变化(P>0.05).尿液标本-20°C冻存,检测前按50:1的比例加入6 mol/L HCl酸化,草酸和枸橼酸稳定性良好,至少可稳定30 d.结论 酶法尿液草酸和枸橼酸试剂盒可用于结石代谢评估,检测结果具有可比性.尿液酸化可保持草酸和枸橼酸稳定,酸化时间无特殊要求.