抗组蛋白H2A抗体间接ELISA法的建立和临床初步应用

摘要

目的 建立检测血清抗H2A抗体的间接ELISA技术,探讨抗H2A抗体对类风湿关节炎(RA)的临床意义.方法 RT-PCR扩增H2 A基因,将其克隆到原核表达载体pET28a,对重组质粒H2 A/pET28a进行原核表达,经Western blot检测后,利用H2 A重组蛋白建立检测人血清中抗H2 A抗体的间接ELISA方法.用建立的间接ELISA方法检测50例RA患者和50例健康人对照组血清抗H2 A抗体水平.结果 表达的H2 A蛋白相对分子量约为15000,与预期大小相符,western blot结果表明组蛋白H2 A与抗H2 A抗体阳性血清具有良好的反应原性.经方法学评估,建立的ELISA法在特异性、可重复性方面均达到检测要求.RA组抗H2A抗体水平高于健康人对照组(P<0.01).当cut-off值设为0.494时,RA患者血清抗H2A抗体的阳性率为84％(42/50),明显高于健康人对照组20％(10/50),差异具有统计学意义(χ2=41.026,P<0.01).结论 成功建立了检测血清抗H2 A抗体的间接ELISA技术.RA患者血清中抗H2 A抗体水平明显高于健康人对照组.抗H2 A抗体在RA患者血清中出现可能具有重要的致病意义.