高效液相色谱-串联质谱法同时测定发酵液中喷司他丁和2'-氨基-2'-脱氧腺苷

摘要

建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)同时测定发酵液中喷司他丁和2'-氨基-2'-脱氧腺苷含量的方法.发酵液经高速离心、水溶液稀释、微孔过滤后进行HPLC-MS/MS分析测定.选用Waters Atlantis?T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,5μm)及其保护柱(5 mm×2.1 mm,5μm)进行分离,选择10 mmol/L甲酸铵(含0.1％甲酸)-甲醇(含0.02％甲酸)溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为25°C,进样量为10μL.在电喷雾电离、正离子模式下收集数据,对目标化合物进行定性定量分析.喷司他丁定量离子对为m/z 269.17>153.20,碰撞能为11 V,2'-氨基-2'-脱氧腺苷定量离子对为m/z 267.00>136.10,碰撞能为18 V.采用外标法对喷司他丁和2'-氨基-2'-脱氧腺苷定量分析.结果表明,喷司他丁和2'-氨基-2'-脱氧腺苷在1.0～250μg/L范围内呈现出良好的线性关系,相关系数(R2)为0.9969～0.9996,相对标准偏差(RSD)为6.51％～8.35％(n=8).在发酵液样品中进行加标水平为1.0、5.0和25μg/L的添加回收试验(n=6),喷司他丁的回收率为97.94％～104.46％,RSD为3.74％～4.88％;2'-氨基-2'-脱氧腺苷回收率为89.96％～107.21％,RSD为4.81％～13.29％.喷司他丁和2'-氨基-2'-脱氧腺苷的检出限为0.003～0.060μg/L,定量限为0.010～0.200μg/L.该文系统性地建立了基于HPLC-MS/MS测定发酵液中喷司他丁和2'-氨基-2'-脱氧腺苷的方法,在实际样品检测中,操作简便,准确度高,灵敏快速,有效克服了基质效应对目标化合物的影响,改善了目标化合物的峰形和稳定性,为从微生物发酵液中检测喷司他丁和2'-氨基-2'-脱氧腺苷提供了方法学基础和借鉴.