新生树鼩心肌细胞与心肌成纤维细胞的分离培养、纯化及鉴定

摘要

目的研究应用树鼩建立人类心血管病理、毒理细胞模型的纯度较高、活力较强的心肌细胞和心肌成纤维细胞的方法。方法使用差速贴壁1．5h纯化心肌细胞进行培养，并比较5-溴-2-脱氧尿苷、阿糖胞苷及TGF—β抑制剂的纯化效率以获取最适纯化方案，培养过程在37℃、5％CO2条件下进行。使用MTT法测定细胞活力以确定方法可行性。利用α-横纹肌肌钙蛋白（α-SA）及心肌肌钙蛋白I（TnI）对树鼩心肌细胞进行免疫组化及免疫荧光鉴定，利用波性蛋白（Vimentin）对树购心肌成纤维细胞进行免疫荧光染色以达到鉴定目的。结果原代培养新生树鼩心肌细胞生长良好。在倒置显微镜下观察，培养10d左右的心肌细胞可以基本完成局部融合并伴有细胞搏动。MTT法检测结果显示，心肌细胞活力可以在最少15d内保持良好水平。细胞鉴定结果显示，树鼩心肌细胞α—SA免疫组化呈阳性，TnI免疫荧光鉴定呈阳性，心肌成纤维细胞呈阴性，符合一般心肌细胞特征；心肌成纤维Vimentin免疫荧光结果呈阳性。结论分离纯化得到的树鼢心肌细胞和心肌成纤维细胞纯度较高、结构完整并具有相对较高的细胞活力，是一种较为理想的、可以应用于树鼩建立人类心血管病理、毒理细胞模型的心肌细胞和心肌成纤维细胞。