circBMPR2通过靶向miRNA-20a/smac轴促进人卵巢癌耐药细胞SKOV-3/Taxol的凋亡

摘要

背景与目的 卵巢癌是育龄期女性常见的恶性肿瘤,多数患者就诊时已为中晚期,导致临床手术成功率和预后较差,化疗耐药是卵巢癌患者不良预后的主要原因。研究报道非编码基因circBMPR2与卵巢癌的化疗耐药密切相关,且对化疗药物介导的细胞凋发挥重要调控作用。本研究探讨circBMPR2是否通过靶向抑制miRNA-20a,进而上调smac的表达,促进人卵巢癌耐药细胞SKOV-3/Taxol凋亡的作用机制。方法 选取2015年5月至2018年5月期间,我院收治并经临床病理组织检查确诊为上皮性卵巢癌的94例患者为观察组,同时选取94例健康女性体检者为对照组,两组研究对象的年龄均为32–66岁,平均年龄为49±1.38岁。采用苏木精–伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,H&E)观察两组研究对象的组织病理变化。采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测两组对象血清中circBMPR2、miRNA-20a的表达水平,酶联免疫吸附测定(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)测定smac的表达。分别采用慢病毒细胞转染和siRNA沉默技术构建circBMPR2过表达和敲减的SKOV-3/Taxol细胞株,分别采用qRT-PCR和蛋白质免疫印迹检测circBMPR2表达变化对miRNA-20a及其下游靶分子smac和凋亡相关信号通路蛋白的mRNA和蛋白水平表达的影响。采用Pearson’s相关性分析研究观察组血清中circBMPR2、miRNA-20a和smac的表达与患者病理分级和预后之间的相关性。结果 两组研究对象的一般临床资料无统计学差异(P>0.05)。组织病理检测结果显示,观察组卵巢癌组织坏死性病理损伤较癌旁组织明显加重。ELISA检测结果显示,观察组血清中circBMPR2和smac表达显著低于对照组,而miRNA-20a的表达水平显著高于对照组(均P <0.001)。qRT-PCR和蛋白质免疫印迹检测结果显示,circBMPR2过表达可显著抑制miRNA-20a和抗凋亡蛋白Survivin的表达,同时上调smac和促凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达(均P <0.05)。结论 circBMPR2可能通过靶向抑制miRNA-20a,进而激活其下游smac/Survivin/Caspase促凋亡信号的活化,发挥促进人人卵巢癌耐药SKOV-3/Taxol细胞凋亡的作用,为临床卵巢癌耐药患者治疗提供新的潜在靶点和早期诊断指标。