逆转录病毒介导反义hTERT对肺癌细胞的抑制作用

摘要

背景与目的:抑制端粒酶活性可以抑制细胞端粒延长,进而抑制永生细胞的增殖.为了探讨以端粒酶为靶的肺癌基因治疗可能性,本实验观察反义人端粒酶逆转录酶组分(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)cDNA对A549肺癌细胞的端粒酶活性和细胞增殖的抑制作用.方法:RT-PCR扩增hTERT mRNA 5′起始端835 bp的cDNA,分别正向和反向插入到逆转录病毒表达载体pLXSN质粒中,转染包装细胞PT67后获得重组病毒,病毒感染肺癌A549细胞.Western blot检测hTERT蛋白表达,TRAP法检测端粒酶活性,倒置显微镜观察细胞形态变化和绘制细胞生长曲线了解细胞增殖情况,流式细胞仪和DNA片段电泳观察凋亡情况.结果:反义hTERT作用肺癌A549细胞后hTERT蛋白表达下降,端粒酶活性被抑制,细胞增殖受到抑制并出现明显的细胞凋亡.结论:反义hTERT对肺癌细胞A549端粒酶活性具有明显的抑制作用,抑制细胞生长,促进细胞凋亡,hTERT有可能成为肺癌基因治疗靶点.