成体大鼠心肌细胞微管解聚对线粒体分布及能量代谢的影响

摘要

目的了解成体大鼠心肌细胞微管解聚对线粒体分布、线粒体活性及细胞能量代谢的影响。方法分离培养成体SD大鼠及SD大鼠乳鼠心肌细胞,按随机数字表法分为:大（乳）鼠对照组（常规培养,不加任何刺激因素）、大（乳）鼠微管解聚剂组（用含终浓度8μmol/L秋水仙碱的培养液培养,作用30 min）。（1）用蛋白质印迹法检测各组大鼠和乳鼠心肌细胞聚合态β微管蛋白表达量。（2）取2组大鼠心肌细胞,用蛋白质印迹法检测细胞色素c表达量;免疫荧光染色法观察细胞聚合态β微管蛋白、电压依赖型阴离子通道（VDAC）分布情况;免疫细胞化学法检测细胞线粒体内膜电位;噻唑蓝法测量细胞活性;采用高效液相色谱法,检测细胞ATP、腺苷二磷酸（ADP）、腺苷一磷酸（AMP）含量及能荷。结果 （1）聚合态β微管蛋白表达量:大鼠微管解聚剂组为0.52±0.07,较大鼠对照组1.25±0.12明显减少（F=31.002,P=0.000）;乳鼠微管解聚剂组为0.76±0.12,较乳鼠对照组1.11±0.24显著减少（F=31.002,P=0.000）,但明显高于大鼠微管解聚剂组（F=31.002,P=0.009）。（2）细胞色素c表达量:大鼠对照组为0.26±0.03,明显低于大鼠微管解聚剂组（1.55±0.13,t=-24.056,P=0.000）。（3）免疫荧光染色:大鼠对照组心肌细胞微管多呈线性管状、与心肌纤维平行分布;VDAC着色显示线粒体呈颗粒状与微管同向分布。大鼠微管解聚剂组微管正常排列规律被破坏,表现为免疫荧光强度减弱,微管结构不清晰、连续性丧失、粗糙;线粒体分布散乱。（4）线粒体内膜电位:大鼠对照组荧光强度为1288±84,明显高于大鼠微管解聚剂组（331±27,t=26.508,P=0.000）。（5）细胞活性:大鼠对照组吸光度值为1.75±0.11;大鼠微管解聚剂组为0.81±0.07,较前者明显降低（t=17.348,P=0.000）。（6）能量代谢:与大鼠对照组比较,大鼠微管解聚剂组心肌细胞ATP含量下降,ADP、AMP含量上升,ATP/ADP值与能荷均降低。结论在正常成体大鼠心肌细胞内,微管与线粒体分布方向一致。微管解聚后心肌细胞线粒体排列紊乱,细胞色素c从线粒体漏出,线粒体内膜电位下降、能量供应降低,细胞活性下降。