晚期糖基化终末产物与其受体对糖尿病创面氧化应激反应的影响

摘要

目的观察糖尿病患者皮肤和创面中晚期糖基化终末产物（AGE）的蓄积和炎症反应,并结合体外干预实验推测两者之间可能存在的关系。方法采集10例2型糖尿病患者（糖尿病组）和12例非糖尿病患者（非糖对照组）的皮肤和创面组织标本,部分于光学显微镜下观察胶原排列、细胞分布（HE染色）,AGE及其受体（RAGE）表达（免疫组织化学染色）;部分匀浆后采用ELISA法检测丙二醛含量。体外采集、分离健康人外周血中性粒细胞,并分为正常对照组（添加RPMI-1640培养液培养）、低浓度干预组、中浓度干预组和高浓度干预组,3个干预组分别在RPMI-1640培养液中添加AGE修饰的人血清白蛋白,其中AGE的浓度依次为0.315、0.625、1.250 mg/mL;噻唑蓝法检测细胞存活率,荧光探针二氢二氯荧光黄双乙酸钠测定细胞内活性氧水平。对数据进行t检验。结果与非糖对照组比较,糖尿病组皮肤组织中胶原萎缩,排列紊乱;创面组织中炎性细胞弥散分布,胶原排列稀疏紊乱。糖尿病组皮肤组织中AGE和RAGE表达均多于非糖对照组;2组创面组织中RAGE呈阳性表达的细胞数量均多于所在组皮肤组织,以糖尿病组更显著,其创面内可见大量RAGE呈阳性表达的炎性细胞。糖尿病组患者皮肤和创面组织中每毫克蛋白丙二醛含量分别为（6.3±1.0）、（7.1±2.4）nmol,均明显高于非糖对照组相应组织[（2.9±1.0）、（3.6±1.4）nmol,t值分别为8.017、4.349,P＜0.05或P＜0.01]。与正常对照组[（34±5）%]比较,低浓度干预组、中浓度干预组、高浓度干预组中性粒细胞存活率均明显上升[（59±8）%、（77±5）%、（67±6）%,t值分别为7.195、14.890、11.130,P＜0.05或P＜0.01]。与正常对照组（0.58±0.06）比较,低浓度干预组、中浓度干预组、高浓度干预组中性粒细胞内活性氧水平均升高（1.67±0.14、2.13±0.17、3.48±0.48,t值分别为20.195、24.905、16.864,P＜0.05或P＜0.01）。结论异常的氧化应激水平导致糖尿病皮肤具有异常的创伤修复起点,创面愈合过程中AGE-RAGE效应是影响糖尿病创面氧化应激水平的重要因素。