基于金属有机框架的固定化酰胺酶制备及催化合成(S)-4-氟苯甘氨酸

摘要

以微水溶剂热法快速制备的稳定锆基金属有机框架为载体,戊二醛为交联剂,采用交联法对酰胺酶进行固定化,考察了不同条件对酰胺酶固定化效率的影响.结果 表明,戊二醛浓度为1.0％、交联时间为180 min、载体与酶的质量比为8∶1,固定化效率最佳,固定化酶活力回收率达86.4％,蛋白负载量达115.3 mg/g.固定化酶最适温度为40°C,最适pH值为9.0,在40°C下半衰期为72.2 d,该固定化酶的Km为58.32 mmol/L,Vmax为16.23 μmol/(min·mg),kcat为l 670 s-1.此外,考察了固定化酶催化合成(S)-4-氟苯甘氨酸的工艺:最适底物浓度300 mmol/L,固定化酶用量10 g/L,反应时间180 min,在最佳反应条件下转化率达49.9％,对映体过量(Enantiomeric excess,e.e.)为99.9％.进一步考察了该固定化酶分批催化反应性能,重复使用20批次后,固定化酶活力仍保留95.8％.