去N端信号肽和C端跨膜区猪卵透明带-3β蛋白在原核系统表达的研究

摘要

猪卵透明带(Zonapellucida,ZP)由生物化学和免疫学性质截然不同的三种糖蛋白(pZPl、pZP3α和pZP3β)组成.由于抗pZP3β抗体能在体外与人ZP发生交叉反应,因此pZP3β一直被认为是研制抗受精避孕疫苗的潜在抗原之一.为了能在原核系统中获得无卵巢因子污染的pZP3β蛋白,本文采用PCR方法删除了原cDNA中编码5′-和3′-端信号肽和跨膜区的DNA顺序.扩增的pZP3β基因核心片段(pZP3β″)经DNA测序验证后,通过引入其两端的EcoRI和SalI酶切位点被定向插入pBV221质粒PRPL启动子下游的多克隆区.SDS-PAGE分析表明:工程菌在热诱导后能特异地表达pZP3β蛋白,并能在蛋白印迹实验中被兔抗pZPIgGs识别.