结核杆菌热休克蛋白70在毕赤酵母中的分泌表达与鉴定

摘要

为获得结核杆菌热休克蛋白70在毕赤酵母中的分泌表达.构建了酵母表达质粒pPIC9K-hsp70,并将其线性化后用电穿孔法导入Pichia pastoris GS115,经PCR方法筛选出阳性菌落,在0.5%甲醇诱导下分泌表达.所得产物经离心收集上清、超滤浓缩脱盐、亲和层析后,分别用 SDS-PAGE、Western blot和动物免疫实验对上清中的重组Hsp70进行鉴定,并考察产物对DC的作用.经SDS-PAGE、Western blot分析表明表达的Hsp70表观分子量为70kD并能特异性地与抗-Mt.Hsp70单抗结合,动物实验表明重组的Hsp70能在体诱导免疫应答.重组Hsp70能够诱导DC成熟并释放Th1型细胞因子.摇瓶发酵表达量达120mg/L,占培养上清30%以上.这为研究结核杆菌热休克蛋白70的生理功能提供了必要的物质条件.