L-乳酸脱氢酶基因克隆及功能分析

摘要

构建了一株产D,L-乳酸的乳杆菌(Lactobacillus sp.)MD-1的基因文库.利用乳酸脱氢酶和丙酮酸裂解酶缺陷的Escherichia coli FMJ144作为宿主,通过互补筛选分离克隆到乳酸脱氢酶基因(ldhL).核酸序列分析表明,该基因以ATG为起始密码子编码316个氨基酸残基组成的蛋白质,预测的分子量为33.84kD;5′端存在典型的启动子结构,3′端的终止子是不依赖于ρ因子的转录终止子.ldhL编码的蛋白质有3个保守区域,其中Gly13～Asp50保守区域是NADH的结合位点,Asp73～Ile100和Asn123～Arg154保守区是酶的活性部位.该ldhL和其他乳杆菌的ldhL基因和编码的氨基酸序列相似性较低,核苷酸序列相似性最高仅为64.1%,氨基酸序列相似性最高仅为68.9%,是新的L-乳酸脱氢酶基因.