小鼠泛素结合酶UBE2W的抗体制备及组织表达谱分析

摘要

泛素结合酶(E2)是蛋白泛素化修饰所需的第二个连接酶,在泛素转移和底物特异性识别过程中发挥着重要作用.UBE2W是一种新发现的E2酶,其果蝇属同源蛋白可能在光转导或视网膜变性过程中发挥作用,鼠和人同源蛋白功能未见报道.生物信息学分析UBE2W鼠源氨基酸序列.发现UBE2W具有典型的UBC结构域并在多种物种高度保守.通过构建UBE2W原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化了GST-UBE2W融合蛋白,以此纯化蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备抗UBE2W多抗血清,并利用制备的UBE2W抗原柱亲和纯化UBE2W多抗.为了检测纯化抗体特异性,在真核细胞中瞬时表达了myc-UBE2W融合蛋白,分别用myc单抗和UBE2W多抗进行Western blotting分析,结果表明获得了特异性的UBE2W抗体.利用此特异性抗体在小鼠脑、心脏,肾脏、肝脏、肺、肌肉、脾脏和睾丸等组织中均检测到了UBE2W的表达,且在小鼠睾丸中成年期表达最高.