热玫瑰小双孢菌来源的丙酮酸磷酸双激酶的表达及应用

摘要

以热玫瑰小双孢菌基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到了编码PPDK的基因,将此基因片段插入到表达载体pET28a(+)中构建得到了重组表达质粒pET28a(+)-PPDK,将重组表达质粒pET28a(+)-PPDK转化到大肠杆菌BL21(DE3)中.经过IPTG诱导,重组菌成功表达了N端带有6-His Tag的重组PPDK.经SDS-PAGE分析,重组PPDK单体分子量为101 kD.经过镍亲和层析和超滤后,重组PPDK蛋白基本达到电泳纯,并被成功应用于焦测序中.