人乳头瘤病毒16型L2E7融合蛋白的优化表达、制备及其对肿瘤生长的抑制作用

摘要

为提高人乳头瘤病毒(HPV) 16型治疗性融合蛋白疫苗HPV16 L2E7在大肠杆菌中的表达量,根据大肠杆菌偏爱密码子,对HPV16 12e7基因进行密码子优化,优化后的基因分别插入到pGEX-5X-1、pQE30和pET41a表达载体中,转化JM109、JM109 (DE3)和BL21 (DE3)表达菌,筛选出高表达菌株pET41a-HPV16sl2e7/BL21 (DE3),目的蛋白从占全菌蛋白的10％以下提高到约28％,优化接种量、IPTG浓度、诱导温度和诱导时间,获得最佳表达条件;通过15L发酵罐发酵,SP Sepharose Fast Flow、Q Sepharose Fast Flow和Superdex 200 pg纯化及复性HPV16 L2E7融合蛋白,制备的融合蛋白纯度可达95％以上,经SDS-PAGE、Western blotting鉴定证实,制备的HPV 16 L2E7蛋白加CpG佐剂对小鼠移植瘤生长具有明显的抑制作用,有75％(6/8)的小鼠不成瘤,为后续的疫苗产业化奠定基础.