热带假丝酵母ctpxa1基因缺失菌的构建及对长链二元酸积累的影响

摘要

Pxa1p为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae过氧化物酶体上的膜蛋白,与Pxa2p组成二聚体,参与转运长链脂肪酸进入过氧化物酶体过程.热带假丝酵母能够发酵烷烃和脂肪酸生产长链二元酸,而过氧化物酶体中发生的B-氧化会消耗产生的长链二元酸造成产率降低.本研究以热带假丝酵母Candida tropicalis 1798为宿主菌,通过基于PCR片段的同源单交换法,快速构建ctpxa1基因敲除菌株C tropicalis 1798-pxa1.利用半定量RT-PCR技术,检测ctpxal基因在C tropicalis 1798、C tropicalis 1798-pxal的表达量,灰度值比值为2.03,表明ctpxal在C.tropicalis 1798-pxa1的表达被弱化.经144 h发酵,C tropicalis 1798-pxal比C tropicalis 1798的十二碳二元酸产量明显提升,其产出浓度为10.3 g/L,比野生型菌株C tropicalis 1798提高了94.3％.