M1GS-HCV/C_(141)核酶的构建及其体外抗病毒活性测定

摘要

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)是引起慢性肝炎的重要病因之一,严重危害公众健康。目前临床HCV感染常采用干扰素联合病毒唑进行治疗,然而应答率不高且易反复。因此,探索新型抗HCV治疗策略及药物显得尤为迫切。针对HCV核心基因的序列,设计与之互补的引导序列(Guide Sequence,GS),通过PCR的方法将其共价连接于大肠杆菌核糖核酸酶P(RNase P)催化性亚基(M1 RNA)的3?末端,成功构建了一种靶向性M1GS核酶(M1GS-HCV/C141)。经体外切割试验、胞内反义效应及胞内毒性研究,结果表明:M1GS-HCV/C141核酶不仅能够在体外对靶RNA片段产生特异性切割,在HCV感染的Huh7.5.1细胞中,也能显著抑制病毒核心蛋白的表达,进而使HCV RNA的拷贝数减少约1 000倍。因此,文中构建的M1GS-HCV/C141核酶在体外具有显著的抗HCV活性,这为HCV治疗研究提供了一条新的潜在途径。