胎肝间充质干细胞和皮肤成纤维细胞有限细胞系的建立及肝向分化研究

摘要

通过体外长期培养胎肝间充值干细胞和皮肤成纤维细胞,建立两种细胞长期培养体系并比较此两种细胞的表型特征及向肝细胞分化的潜能。方法 从人胎肝中分离贴壁生长的间充质干细胞,同时取同一个体的皮肤组织,分离培养成纤维细胞。采用免疫细胞化学法及流式细胞术检测上述两种细胞的CD34,CD90,CD105等细胞表型;染色体分析及软琼脂克隆形成实验鉴定细胞的生物学特性。利用肝细胞生长因子(HGF),成纤维细胞生长因子4(FGF4)、抑瘤素M(OsM)等组成的肝细胞培养基对P3-30细胞进行肝细胞诱导分化。采用免疫细胞化学方法对诱导和未诱导的细胞进行白蛋白(ALB)、CK18、CK19等免疫学检测。PAS法糖原染色,RT-PCR法检测甲胎蛋白(AFP)和ALBmRNA表达。结果 胎肝间充质干细胞高表达CD90,而皮肤成纤维细胞几乎不表达。在肝细胞条件培养基中培养,成纤维细胞转化为类肝细胞的比例为(5.1±0.2％,而胎肝间充质干细胞转化为类肝细胞的比例为(10.3±0.3)％,两组差异有统计学意义(P＜0.01)。此两种细胞均可在体外长期稳定培养,传50余代,保持正常核型,无致瘤性,但难以无限传代。结论 成体组织中体外能够长期培养的间充质干细胞可能是有一定寿命的。特定成体组织内的间充质干细胞可能具有更高的分化为所在组织实质细胞的潜力。