可调控的胰岛素基因表达载体的构建及其体外表达研究

摘要

目的构建四环素调控的胰岛素基因表达载体,并研究其体外转移后的表达情况.方法通过基因重组技术构建胰岛素基因的四环素调控表达系统,用脂质体转移法导入成肌细胞,以不同浓度的强力霉素诱导,检测诱导后胰岛素原mRNA表达及胰岛素/胰岛素原水平.结果RT-PCR显示此基因能在真核细胞内表达.细胞培养液中胰岛素水平在加药24 h后开始增加,至第7天仍在增加,撤药后迅速下降,至撤药后第5天下降到基础水平.不同诱导药物浓度诱导的胰岛素产量明显不同(P＜0.05),而细胞内和培养基中的胰岛素浓度无明显差异(P＞0.05).结论单一四环素调控的胰岛素原表达系统能在真核细胞内表达,并呈现强力霉素浓度依赖性.