Necrostain-1对缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元caspase非依赖性死亡的保护作用

摘要

目的研究低氧诱导因子（HIF）-1α是否介导缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元caspase非依赖性细胞死亡,Necrostain-1（Nec-1）能否抑制其表达起到保护作用。方法 （1）原代皮质神经元培养14 d,予caspase抑制剂z-VAD.fmk（z-VAD）预保护30min,同时分别予Nec-10.1,1,5,10,25,50μmol/L,缺糖缺氧（OGD）2h、再灌注12 h,通过LDH测细胞死亡情况;（2）予z-VAD作用后30min后,缺糖缺氧（OGD）2h再灌注0,2,6,12,24,48 h,Westernblot检测HIF-1α蛋白表达情况,RT-PCR测HIF-1αRNA表达;（3）予z-VAD和Nec-125μmol/L作用30min,OGD2h、再灌注12 h后检测HIF-1α蛋白及RNA表达情况。结果 （1）予Nec-1 5μmol/L（6.97±0.06）后与未加Nec-1组（14.23±0.08）比较LDH水平明显下降（P＜0.05）,Nec-1 25μmol/L（2.21±0.05）时LDH降至正常水平与正常组（1.03±0.03）比较,P＞0.05);（2）缺糖缺氧2 h再灌注后HIF-1α蛋白表达增加,再灌注2h后（0.57±0.09）与正常组（0.24±0.01）相比差异有统计学意义（P＜0.05）,再灌注12h（0.91±0.08）达高峰,HIF-1αRNA表达无变化（P＞0.05）;（3）与未予Nec-1组（0.83±0.03）相比,Nec-1组（0.32±0.04）HIF-1α蛋白表达明显降低（P＜0.05）,HIF-1αRNA表达无变化（P＞0.05）。结论 HIF-1α介导了缺氧缺氧诱导的原代皮质神经元caspase非依赖性死亡,Nec-1能够抑制HIF-1α的表达起到保护作用。