鞘内注射驱动蛋白17反义寡核苷酸对骨癌痛小鼠脊髓水平mLin10和NR2B蛋白表达的影响

摘要

目的探讨鞘内重复注射驱动蛋白17（Kinesin superfamily 17,KIF17）反义寡核苷酸对骨癌痛小鼠脊髓水平mLin10（mammalian orthologue of the caenorhabditis elegans LIN-10,mLin10）和NR2B（the 2B subunits of N- methyl-D-aspartate Receptor,NR2B）蛋白表达的影响。方法 56只雄性C3H/HeJ小鼠,4～6周龄,体质量20～25 g,随机数字表法分为假手术组（S组,n=20）和骨癌痛组（T组,n=36）。T组小鼠右侧股骨骨髓腔内注射约含2×105个NCTC2472纤维肉瘤细胞的最小必须培养基（α-MEM） 20μl制备骨癌痛模型,S组小鼠注射不含肿瘤细胞的α-MEM 20 μl。各组于接种前（base）、接种后第4,7,10,14天行痛行为学测试并在相应时间点取24只小鼠用western blot法测定脊髓KIF17、mLin10和NR2B蛋白含量。再将T组剩余24只小鼠随机分为T1,T2,T3组,每组8只。接种后第14天起,连续6 d同一时间行鞘内穿刺给药,S组和T1组注射5μl生理盐水,T2组和T3组分别注射KIF17正义、反义寡核苷酸5 μg/5 μl。连续给药,第2～6天行痛行为学测试,第6天再次测定脊髓相关蛋白含量。结果接种后7～14 d,与S组和基础值相比,T组小鼠自发抬足次数增多,机械缩足阈值降低（P＆0.05）,与基础值[（0.65±0.15）、（1.06±0.06）、（1.01±0.14）]相比,T组小鼠脊髓水平KIF17、mLin10和NR2B蛋白表达[14 d:（1.13±0.06）、（2.17±0.37）、（1.85±0.32）]增多（P＆0.05）;给药期间,与T1和T2组相比,T3组小鼠自发抬足次数减少,机械缩足阈值升高（P＆0.05）,给药后脊髓水平KIF17、mLin10和NR2B蛋白表达[（0.88±0.08）、（0.96±0.11）、（1.03±0.08）]减少（P＆0.05）。结论重复鞘内注射KIF17反义寡核苷酸能明显改善骨癌痛小鼠的痛行为,并抑制了脊髓水平KIF17、mLin10和NR2B蛋白表达上调。