改良法分离培养SD新生乳鼠原代心肌细胞

摘要

目的:建立一种稳定、快速的SD新生乳鼠原代心肌细胞分离培养改良方法.方法:取SD新生乳鼠心室,0.12％Ⅱ型胶原酶消化,Percoll密度梯度离心结合5-溴脱氧尿嘧啶(5-BrdU)化学抑制法纯化心肌细胞,体外培养于含5％马血清的改良DMEM/F12中,次日更换为普通含10％胎牛血清的高糖DMEM继续培养,并比较此改良方法与传统差速贴壁法的差异.结果:改良法获得的心肌细胞生长良好,接种24 h后几乎全部贴壁生长,细胞呈三角形、梭形或不规则形,个别细胞出现自主搏动,频率为10～30 beats/min不等.48 h后心肌细胞变长伸出伪足,部分细胞呈现同步搏动,频率接近50～80 beats/min.72 h后心肌细胞成菊花样交织成网,自发搏动趋于同步,频率加快至80～100 beats/min;96 h后细胞聚集成簇,呈岛屿样,同步搏动频率在100～120 beats/min左右,一周内细胞状态良好.改良法纯化原代心肌细胞的得率((1.17±0.15)×106 vs(1.21±0.22)×106,P>0.05)和存活率与传统差速贴壁法相当(93.3％±1.4％vs 92.2％±0.7％,P>0.05),但是改良方法获得的原代心肌细胞纯度更高(94.7％±2.1％vs 89.5％±1.3％,P<0.05),且用时较短((3.1±0.4)h vs(4.3±0.3)h,P<0.01).结论:改良法获得心肌细胞耗时短、纯度高、结构功能保存完整,且实验重复和稳定性好,是一种理想且简单易行的的原代心肌细胞分离培养方法.