卡介菌CpG DNA复合佐剂-02系统(BC-C02)有效性与安全性评价

摘要

目的 对卡介菌(BCG) CpG DNA复合佐剂-02系统(BC-C02)的有效性及安全性进行评价,为其应用提供研究基础.方法 以流式细胞法检测经CpG DNA与细胞体外共培养后B细胞内TLR-9,巨噬细胞内IL-12、TLR-9表达,以酶联免疫斑点法检测人外周血单个核细胞(PBMC)经CpG DNA刺激后IL-12的分泌.单纯H1N1抗原低、中、高三个剂量组及三个剂量抗原添加CpG DNA后免疫小鼠,每组20只动物,免疫后测定其抗体效价及H1N1病毒感染后死亡率.经Mtb感染后豚鼠,以Ag85B+ BC-C02疫苗低、中、高组与BC-C02及生理盐水(NS)进行免疫治疗,每组10只豚鼠,观察动物脏器结核病变指数.同时分别检测CpG DNA注射小鼠后IgE产生和复合佐剂BC-C02注射豚鼠后全身过敏毒性.结果 BC-C02中的生物佐剂可刺激B细胞增殖[佐剂组CD19+％为41％,培养基对照组(NCS)组为27％；t=-4.40,P＜0.05]；促进B细胞内TLR-9表达(佐剂组CD19+ TLR-9+％为2.8％,NCS组为1.1％;t=-5.92,P＜0.05)；上调巨噬细胞表面MHC-Ⅱ类分子表达(佐剂组F4/80+I-A/I-E+％为82％,NCS组为31％;t=-4.32,P＜0.05)；可促进巨噬细胞内TLR-9和IL-12的分泌(佐剂组F4/80+ I-A/I-E+TLR-9+ IL-12+％为2.1％,NCS组为0.1％；t=4.80 P＜0.05).BC-C02中的生物佐剂作为H1N1疫苗佐剂,在检测时间内(5、7、14、28 d),PBS组4个时间点血凝抑制(HI)抗体滴度均＜10; H1N1低剂量组滴度＜中剂量组滴度＜高剂量组滴度,抗原复合CpG组均高于单纯抗原组,且佐剂可促进抗原特异性IgG2a的提高.H1N1保护力实验中,PBS组、H1N1低剂量组、H1N1低剂量+CpG DNA组、H1N1高剂量组、H1N1高剂量+CpG DNA组存活率分别为30％、50％、90％、100％、100％,显示佐剂可提高40％动物存活率.Mtb潜伏感染动物经疫苗治疗后,对照组动物100％病变,疫苗组完全转阴的动物达到30％,而且病变指数＜30的动物达到60％～70％.佐剂注射小鼠后IgE抗体与NS无区别,豚鼠过敏毒性试验显示佐剂不会引起动物全身过敏反应.结论 BC-C02既能诱导细胞免疫反应,也能诱导体液免疫反应,并能提高疫苗保护效力,可作为一种新型疫苗用佐利的候选佐剂.